植物組織切片制作以及注意事項

1、植物組織石蠟切片的制作以及注意事項植物組織石蠟切片的制作以及注意事項1植物組織石蠟切片的制作方法植物組織石蠟切片的制作方法⑴固定：用50%或70%FAA固定液（50%或70%酒精：甲醛：冰乙酸=16:1:1幼嫩材料用50%FAA；老的材料用70%的FAA），置于4℃固定24h。⑵脫水：將固定液倒去，加入50%乙醇，室溫靜置30min；重復(fù)一次，室溫靜置20min。換成1%番紅O溶液(用70%酒精配制)，室溫脫水染色過夜。次日繼續(xù)脫水，酒

2、精濃度梯度和時間依次為：80%乙醇1h、95%乙醇1h、無水乙醇1h、40min（2次）。⑶透明：12無水乙醇二甲苯混合液1h，純二甲苯1h、40min（2次）。最后加入少量二甲苯（浸沒材料即可）和碎蠟，放入38℃溫箱中過夜。⑷浸蠟：將溫箱溫度調(diào)至56℃，計時1h；換成二級蠟1h；三級蠟（3次）各1h、1h、40min（從溫度上升到56℃開始計時）。⑸包埋：將帶有材料的液體蠟倒入疊好的紙槽中，迅速放入冰水中使蠟?zāi)?，防止氣泡產(chǎn)生，以及凝

3、蠟不勻。⑹切片：修整蠟塊，用LicaRM2126切片機切片，厚度510μm。⑺貼片:在載玻片上涂少許粘片劑，將切好的蠟帶放入溫水中，撈至載玻片上，最后置于37℃恒溫箱過夜烤片。⑻脫蠟及染色：①番紅固綠對染ⅰ脫蠟：二甲苯60min，二甲苯5min、12無水乙醇12二甲苯混合液5min、無水乙醇5min、無水乙醇5min、95%乙醇5min、80%乙醇5min、1%番紅室溫過夜。ⅱ染色：80%乙醇5min，1%固綠（用95%酒精配制）迅速蘸

4、一下，大約10s，直接放到95%乙醇5min、無水乙醇5min、無水乙醇5min、12無水乙醇12二甲苯混合液5min、二甲苯5min（2次）。假如擔(dān)心，最好底下放一個培養(yǎng)皿接著，如有倒出，則流在皿里面，容易觀察到，可以重新放在瓶中。如果不能順利的將瓶子里的脫水酒精倒干凈，則建議找一個橡膠洗頭，套上1ml槍頭，將里面的液體全部吸出。這樣也避免用槍吸，有機溶劑腐蝕槍而使得槍受到破壞。當(dāng)重新?lián)Q完下一梯度的脫水酒精時，一定要檢查是否有組織粘在

5、瓶壁上，而沒有浸泡在脫水液體里，使得脫水不干凈。當(dāng)脫水至純酒精和二甲苯時，一定不能讓組織在就酒精中停留的時間太長，時間一長容易使得組織變硬變脆，此時以及以后的操作的步驟中，動作一定要輕緩，任何操作儀器一定不能碰到組織。第2次二甲苯透明結(jié)束時，倒掉瓶中的大部分二甲苯，留底部的液體在。然后給瓶子倒入事先準(zhǔn)備好的碎末固體蠟，在試驗臺蹦實，使得組織完全包埋在碎蠟里。放在37度恒溫箱過夜。這樣做的目的是因為植物組織有細(xì)胞壁，石蠟不容易浸入組織，因

6、此需要足夠長時間的浸蠟。（3）浸蠟次日將恒溫箱調(diào)至56度后開始計時，浸蠟。1h后倒掉瓶里的石蠟，換上新鮮的純石蠟，必須要過濾，并且溫度不能太高或者太低。換下的蠟里由于含有事先殘留瓶中的二甲苯，必須將其中的二甲苯揮發(fā)掉，才能使用，因為石蠟里假如含有二甲苯的話，會使得石蠟?zāi)毯笞冘?。一旦包埋了組織，切片是由于蠟軟不易切片。消除石蠟里二甲苯的方法時，將蠟在電爐上煮，二甲苯將變成氣泡，而揮發(fā)掉，直到液體石蠟不再產(chǎn)生氣泡。還有一點值得提出的是，新