柱分離步驟詳細(xì)

1、操作流程：操作流程：吸附劑用量的確定→柱子的選擇→裝柱→柱留體積的測(cè)量→加樣或拌樣→洗脫→分部收集→檢測(cè)→合并→濃縮材料選擇：材料選擇：硅膠：吸附色譜——1g樣品20～50g，特例1g樣品500～1000g，用前最好120烘24h，可不做活性測(cè)定。分配色譜——1g樣品100～1000g，特例1g樣品10000g。色譜柱的選擇：徑長(zhǎng)比一般為1:10～1:20，特例1:40；一般吸附劑應(yīng)填充到柱子體積的14～15左右。濕裝法裝柱濕裝法裝柱：

2、準(zhǔn)確量取一定體積的溶劑倒入稱(chēng)量好的吸附劑，間歇性攪拌數(shù)次，靜置過(guò)夜，次日在攪拌下裝柱。將濕硅膠一次倒入已處理好的柱內(nèi)，打開(kāi)下口開(kāi)關(guān)，讓水緩緩流出，在吸附劑下沉的同時(shí)，可用橡皮塞對(duì)稱(chēng)輕輕敲擊色譜柱，使吸附劑裝填均勻。待液面降至吸附劑頂部1厘米處時(shí)，關(guān)住下口，量取流出體積，求出柱內(nèi)保留體積（加液量流出液量），并以此確定開(kāi)始收集洗脫液的時(shí)間。然后再加壓用淋洗劑“走柱子”，45mlmin的流速過(guò)柱，待最后通過(guò)柱的蒸餾水在吸附劑上端約1厘米時(shí)，關(guān)

3、住下口，上樣。加樣：加樣：將樣品溶于合適的溶劑，在不擾動(dòng)吸附劑層面的情況下，加到柱體上面。然后在樣品上部放一層石英砂。以免洗脫劑破壞硅膠面平整。最后在用少量清潔溶劑對(duì)主壁洗滌2～3次。選取固相萃取小柱（規(guī)格：0.5x7cm），柱層析硅膠，粒度為0.0750.15mm，比表面積大于500m2，青島海洋化工廠；正己烷、二氯甲烷和無(wú)水乙醇均為分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。吸附劑處理及制備：吸附劑處理及制備：把柱層析硅膠用二氯甲烷索式抽提3

4、6h至無(wú)熒光，待溶劑揮發(fā)后在200℃下活化4h，干燥器中冷卻，稱(chēng)取一定量處理好的硅膠裝入固相萃取空柱中。洗脫實(shí)驗(yàn)：洗脫實(shí)驗(yàn)：稱(chēng)取一定量的樣品，置于固相萃取柱的上端，根據(jù)洗脫順序依次加入一定量的正己烷、二氯甲烷和無(wú)水乙醇洗脫溶劑來(lái)洗脫樣品中的飽和烴、芳烴和膠質(zhì)組分（主要為極性物質(zhì)）。正己烷加入到一定體積時(shí)，用表面皿取一滴下端流出的洗脫液，滴加一滴指示劑（甲醛，滴加到1mL濃硫酸中，混勻），紅色出現(xiàn)說(shuō)明正己烷洗脫劑把芳烴中的單環(huán)芳烴組分帶出

5、；此時(shí)馬上換一個(gè)接收瓶，再加入一定量的二氯甲烷洗脫芳烴組分，觀察吸附在萃取柱上黑色膠質(zhì)環(huán)的移動(dòng)來(lái)判斷二氯甲烷的加入量，當(dāng)黑色膠質(zhì)環(huán)移動(dòng)到固相萃取柱的最下端時(shí)，表明芳烴組分已經(jīng)全部流出，此時(shí)停止加入二氯甲烷，更換另一個(gè)接收瓶，再用無(wú)水乙醇洗脫，最后把膠質(zhì)組分洗脫下來(lái)。分離優(yōu)化：分離優(yōu)化：當(dāng)固相萃取材料與樣品重量比為3050∶1、飽和烴洗脫溶劑與樣品的重量比為4045∶1、飽和烴溶劑洗脫速率為30mLmin時(shí)，達(dá)到的分離效果最好。注：C18