熒光探針的光譜性質_第1頁
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文檔簡介

1、緒論1.1前言Aβ140是阿爾茨海默病的主要標志物之一,且Aβ單體可以自組裝成高度有序的結構,包括二聚體、三聚體、四聚體,或者更大的結構,直至形成纖維。研究表明,Aβ寡聚體具有更強的神經毒性,二聚體和三聚體會破壞神經纖維的彈性,而三聚體和四聚體的毒性是Aβ纖維的二倍??傊?,研究表明Aβ早期積聚體可能是疾病診斷的依據之一[16]。因此能夠及時、簡便、有效的檢測出Aβ的這種異常的現(xiàn)象,則對于預防和治療AD既有重要的理論意義又有實際意義。為了

2、檢測Aβ的寡聚體,已經發(fā)展了抗體和單鏈抗體技術[78],已報道這些抗體和特征分子形成特異性識別作用[9]。熒光分析法靈敏度高,使用方法簡便,而且樣品處理簡單,具有在溶液中可無損、實時連續(xù)檢測等優(yōu)點,因此得到廣泛應用[1621]。本文基于Aβ抗體的研究基礎,結合熒光技術,以Aβ的DNA適配體為識別基團,結合熒光分析方法特點,制備熒光探針,識別Aβ早期積聚體。而探針TSO508序列(5to3)為GCCTGTGGTGTTGGGGCGGGTGC

3、G。本文針對探針TSO508對Aβ作用及檢測進行實驗。我們的實驗證明,所制備的熒光探針對Aβ140具有一定的識別作用,但是由于用于檢測的Aβ140沒有以分子量將其區(qū)分,所以識別作用不是特別穩(wěn)定,下一步準備看能否將Aβ140分開,特征檢測二聚體和三聚體。2實驗部分2.1試劑和藥品TSO508(生物工程上海股份有限公司,1mg,AR)修飾5JOE3TAMRA,JOE:2,7二甲基4,5二氯6羧基熒光素,是熒光素衍生物的一種,6JOE更被廣泛

4、使用。JOE熒光保持所用儀器的清潔。每次加入試劑之前要用擦鏡紙擦拭移液槍、微量進樣器等,并多次更換移液頭。②第2組為Aβ純度為95.65%加入0.5mL二甲基亞砜配置成濃度為462μM的Aβ作為工作液2,TSO508探針仍使用第1組中配置好的濃度。儀器及實際操作同上,但唯一不同的是本次實驗要控制溫度為37,打開白色暗箱使其停留在stby狀態(tài),同時打開恒溫水浴鍋,此時要注意檢查循環(huán)水是否正常流通,待溫度達到37℃時才可以開始掃描。(水浴鍋

5、上顯示的溫度不準,以界面上溫度控制系統(tǒng)顯示的溫度為準),每次加入試劑后待溫度穩(wěn)定后再掃描。③第3組為Aβ純度為98%,加入0.5mL二甲基亞砜配置成濃度為462μM的Aβ作為工作液2;TSO508仍用第1組配置好的濃度;儀器與試劑操作同第一組。此次實驗同樣控制溫度,但不用恒溫水浴鍋,采用試管加熱器。首先將試管加熱器設置為37℃,之后在每次加入工作液后將比色皿放入試管加熱器中大約加熱5min即可達到37℃,取出并快速放入熒光檢測儀中進行掃

6、描。(2)熒光探針的測定熒光光譜的測定,取2.0mlTE緩沖溶液置于已洗滌干凈并用其溶液潤洗過的比色皿中,作為參比,設定激發(fā)波長526nm,中速掃描,響應時間為自動,測定范圍為527650nm,掃描出發(fā)射線;再設定發(fā)射波長為553nm,中速掃描,響應時間為自動,測量范圍為450550nm,掃描出激發(fā)線,熒光激發(fā)狹縫寬度為10nm,發(fā)射狹縫寬度為5nm。再向比色皿中加入5μL工作液1,設定激發(fā)波長526nm,中速掃描,響應時間為自動,測定

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