固定化葡糖淀粉酶通過高度活化的乙二醛瓊脂糖載體共價修飾酶表面

1、固定化葡糖淀粉酶：通過高度活化的乙二醛瓊脂糖載體共價修飾酶表面摘要：商業(yè)糖化酶固定不變的高活性乙二醛瓊脂糖載體非常緩慢。所得衍生物是只有6倍比可溶性酶更穩(wěn)定。只有6倍，比水溶性酶更穩(wěn)定。未修飾的淀粉酶，高度糖基化的，只有少量賴氨酸能夠與載體上乙二醛基團(tuán)反應(yīng)。因此，酶表面通過羧基的化學(xué)修飾高度富集的氨基組（帶碳二亞胺激活）與乙二胺。胺化的酶保持了良好的活性（80％）和它的百分表現(xiàn)出相同的穩(wěn)定性比未修飾的酶。固定化酶的固定化非常迅速的高活性

2、乙二醛瓊脂糖載體。新生成的衍生物保留活性的50％，是超過500倍，比在熱滅活的實(shí)驗可溶性酶更穩(wěn)定。1簡介葡糖淀粉酶（α14D葡聚糖葡糖水解酶，EC3.2.1.3），也稱為淀粉葡糖苷酶（AMG），是一種外切酶作用于從直鏈淀粉，支鏈淀粉和糖原的非還原端以連續(xù)的方式釋放出14糖苷鍵D葡萄糖。它也水解α（1→6）和α（1→3）糖苷鍵，但與水解α（1→4）鍵速率相比慢得多。葡糖淀粉酶是一種工業(yè)上重要的酶和它用于麥芽寡糖大量轉(zhuǎn)化成葡萄糖和食品、飲料

3、和發(fā)酵工業(yè)中所需的各種糖漿。該工業(yè)過程將通過使用固定化系統(tǒng)將更具經(jīng)濟(jì)效益，因為它們允許酶的再利用和常常導(dǎo)致也在針對不同的失活酶的穩(wěn)定性的提高劑，例如，高溫。葡糖淀粉酶的固定化已被使用各種載體（無機(jī)材料，聚合物，磁性粒子的研究，等）和不同的酶載體偶聯(lián)方法，如吸附或共價偶聯(lián)到固體基質(zhì)ABT（瓊脂糖珠科技）（馬德里中所需的各種糖漿，西班牙）購買。DEAE瓊脂糖4B是從GEHealthcase生物科學(xué)AB（Uppsala的購買中所需的各種糖漿，

4、瑞典）。23環(huán)氧1丙醇（glycydol），乙二胺（EDA），22連氮基雙（3乙基苯并噻唑6磺酸）二銨鹽（ABTS）中所需的各種糖漿，hydrochlo騎N（3二甲基氨基丙基）N乙基碳二亞胺鹽酸鹽（CDI）和硼氫化鈉購自Sigma化學(xué)購買。有限公司（圣路易斯，密蘇里州，美國）。高碘酸鈉自Fluka（NEU烏爾姆中所需的各種糖漿，德國）購買。有機(jī)溶劑和所有其他試劑均為分析純。2.2純化商業(yè)AMG添加劑加入到商業(yè)酶制劑穩(wěn)定酶分子。一些添加劑

5、被吸附在酶表面，阻礙酶表面與活化的載體之間的相互作用（數(shù)據(jù)未示出）。除此之外，添加劑由于固定化酶的存在可以影響真正的穩(wěn)定因素，（固定化酶的半衰期和可溶性酶之間比率）。這樣，在商業(yè)AMG的純化中，以消除所述穩(wěn)定的添加劑。商業(yè)AMG通過DEAE瓊脂糖吸附脫附法純化，然后通過透析針對于4℃在溫和攪拌過量的磷酸鈉緩沖液，pH7.0為24小時，并使用10至12kDa的截止膜。2.3酶活性測定可溶性和固定化AMG的酶活性在25℃下，在pH6.5，5