阿特拉津?qū)Ψ侵拮负椭腥A大蟾蜍發(fā)育毒性作用的研究.pdf

1、目的：
　　 本文以兩棲類動物非洲爪蟾、中華大蟾蜍為模型動物,暴露不同濃度的阿特拉津,在其變態(tài)發(fā)育的不同時間點進行取樣,分析和探討阿特拉津?qū)蓷惿婧托韵侔l(fā)育的毒性。運用Real time RT-PCR,對性別分化和性腺發(fā)育相關基因進行篩選和驗證,闡明阿特拉津?qū)蓷惏l(fā)育毒性作用的分子機制。
　　 方法：
　　 以非洲爪蟾、中華大蟾蜍為模型動物,進行暴露分組實驗。設定0.05％DMSO陰性對照組、雌二醇(E2)

2、陽性對照組,阿特拉津?qū)嶒灲M設0.1、1、10、100μg/L四個濃度。在非洲爪蟾、中華大蟾蜍性別分化和性腺發(fā)育關鍵時期進行取樣,一部分性腺進行組織病理學檢測,觀察阿特拉津?qū)煞N動物性腺的發(fā)育毒性,包括形態(tài)發(fā)育、性腺組織中卵母細胞、卵泡、精母細胞、精子細胞和輸精導管等各類細胞形態(tài)結構的毒性作用。另一部分性腺和肝臟快速置于液氮中,運用Real timeRT-PCR,對性別分化和性腺發(fā)育相關基因進行篩選和驗證,闡明阿特拉津?qū)蓷惏l(fā)育毒性作用

3、的分子機制。
　　 結果：
　　 1.阿特拉津?qū)Ψ侵拮干L發(fā)育和性腺發(fā)育的影響
　　 阿特拉津?qū)Ψ侵拮傅囊话闵L情況無顯著性影響。阿特拉津引起非洲爪蟾肝臟系數(shù)的相對升高0.1、100μg/L阿特拉津暴露組中,幼蛙的脂肪體出現(xiàn)黃色小斑點、體積小、粘連甚至退化的現(xiàn)象,一定程度上延緩了性腺發(fā)育O.1和100μg/L暴露組蝌蚪完成變態(tài)所用時間長于對照組,同時長于1、10μg/L暴露組,變態(tài)完成時間呈現(xiàn)“U”字型,阿特

4、拉津在一定程度上抑制了蝌蚪的變態(tài)。阿特拉津并沒有引起非洲爪蟾性別比的明顯變化。1μg/L阿特拉津暴露組中雄性性腺出現(xiàn)異常節(jié)段。
　　 2.阿拉津?qū)Ψ侵拮感韵賰?nèi)基因表達變化和肝臟內(nèi)卵黃蛋白原表達變化的影響
　　 非洲爪蟾性腺發(fā)育相關基因ER、ARO,暴露組與對照組相比差異不顯著；雄性肝臟VTG均有微量表達,但各組之間并無顯著性差異。
　　 3.阿特拉津?qū)χ腥A大蟾蜍生長發(fā)育和性腺發(fā)育的影響
　　 阿特拉津中

5、華大蟾蜍的一般生長情況無顯著性影響。100μg/L暴露組死亡率與對照組有顯著性差異(P<0.05)。實驗結束時,阿特拉津暴露組中仍有未完成變態(tài)的蝌蚪,實驗組按濃度梯度由小到大,未完成變態(tài)的個數(shù)分別為2只,2只,3只,2只,E2同樣剩余2只,表明阿特拉津在一定程度上延長了蝌蚪變態(tài)時間,抑制了其變態(tài)發(fā)育；阿特拉津沒有引起中華大蟾蜍性別比和性腺形態(tài)的變化。
　　 4.阿特拉津?qū)煞N動物模型性腺組織學的影響
　　 阿特拉津?qū)е虏G

6、丸組織結構變得疏松,組織內(nèi)出現(xiàn)類似于卵巢組織的空隙；睪丸發(fā)育遲緩,組織內(nèi)充滿初級精原細胞和次級精原細胞,缺少精子；睪丸組織內(nèi)生殖細胞數(shù)量明顯減少,甚至出現(xiàn)萎縮,引起雄性性腺組織學發(fā)生雌性化改變和退行性變化。
　　 結論：
　　 1.阿特拉津?qū)Ψ侵拮傅囊话闵L情況無顯著性影響；阿特拉津在一定程度上抑制了非洲爪蟾蝌蚪的變態(tài)；幼蛙脂肪體出現(xiàn)病變,影響了性腺發(fā)育；性別比沒有變化；雄性性腺出現(xiàn)異常節(jié)段。
　　 2.阿特拉

7、津?qū)Ψ侵拮感韵侔l(fā)育相關基因和肝臟卵黃蛋白原基因表達水平無顯著性影響。
　　 3.阿特拉津?qū)χ腥A大蟾蜍的一般生長情況無顯著性影響；高劑量阿特拉津?qū)е轮腥A大蟾蜍蝌蚪出現(xiàn)較高的死亡；阿特拉津?qū)е虏糠烛蝌轿赐瓿勺儜B(tài),在一定程度上抑制了蝌蚪的變態(tài)；性別比沒有變化,沒有引起性腺形態(tài)的變化。
　　 4.阿特拉津?qū)煞N動物模型性腺組織學影響主要表現(xiàn)為:睪丸組織結構變疏松,組織出現(xiàn)類似于卵巢組織的空隙；睪丸發(fā)育遲緩,組織內(nèi)充滿初級精原細