霉菌毒素的控制檢測方法以及解決方案

1、霉菌毒素的控制/檢測方法以及解決方案,控制飼料原料中霉菌毒素的辦法,農(nóng)作物的耕種:種植對霉菌有抵抗力的品種使用有效的昆蟲控制方法維持好的灌溉系統(tǒng)實行良好的耕作, 農(nóng)作物輪換, 雜草控制收割時:適當?shù)氖崭顣r間迅速降低水份除去多余的雑質(zhì),收獲后及儲藏:保護儲藏的原料/產(chǎn)品不被水份, 昆蟲, 及其它環(huán)境因素的侵害保存原料/產(chǎn)品在干燥干凈的表面測試所有要使用的原料的霉菌毒素貯存桶及管路的定期清理先進先出收獲后, 加工

2、, 制造:測試所有要使用的原料及成品的霉菌毒素監(jiān)控加工過程以維持高品質(zhì)的產(chǎn)品貯存桶及加工設(shè)備的定期清理依照GMP程序,,控制飼料原料中霉菌毒素的辦法,飼喂動物:保存產(chǎn)品在干燥干凈的表面先進先出貯存桶及飼喂系統(tǒng)的定期清理水槽的定期清理墊料,,控制飼料原料中霉菌毒素的辦法,,如何解決霉菌毒素的危害？,霉菌毒素的預(yù)防1,控制飼料原料的質(zhì)量。關(guān)鍵在于嚴格控制原料的含水量，一般要求玉米、高粱、稻谷等的含水量應(yīng)不超過14%；大豆及

3、其餅粕、麥類、糠麩類、甘薯干、木薯干等的含水量應(yīng)不超過13%；棉籽餅粕、菜籽餅粕、向日葵餅粕、亞麻仁餅粕、花生仁餅粕、魚粉、骨粉及肉骨粉等的含水量應(yīng)不超過12%。,霉菌毒素的預(yù)防2,預(yù)防： 使用優(yōu)質(zhì)防霉劑，預(yù)防原料或成品飼料霉變。飼料防霉劑種類很多，目前使用最廣泛的是丙酸及其鹽類（包括丙酸鈉、丙酸鈣、丙酸銨和二丙酸銨）、山梨醇及其鹽類、雙乙酸鈉等是常用的防霉劑。飼料一旦污染應(yīng)使用有效的霉菌毒素吸附劑。,霉菌毒素的控制,物理、化學(xué)處理法

4、2）生物轉(zhuǎn)化法3）吸附法（霉菌毒素吸附劑）,霉菌毒素的脫毒,物理化學(xué)方法？方便性如何？適口性如何？,吸附劑法,為了減少損失， 很多學(xué)者采用一些物質(zhì)作為霉菌毒素的吸附劑來處理霉變飼料， 即在飼料中添加可以吸附霉菌毒素物質(zhì)， 使毒素在經(jīng)過動物腸道時不被動物所吸收， 直接排出體外。例如：甘露低聚糖，水合鋁硅酸鹽類，膨潤土，蒙脫石等。,,市場上霉菌毒素吸附劑產(chǎn)品主要類型,黏土類吸附劑；    酵母細胞壁提取物；

5、 酶解毒劑； 微生物解毒劑； 中草藥制劑；,粘土類吸附劑,Silicon tetrahedron: SiO44-,Aluminum octahedron: AlO69-,硅及鋁 – 地球上最豐富的礦物質(zhì) 不同的硅及鋁組合造成不同的粘土類粘土類吸附劑是自然礦產(chǎn) 粘土類吸附劑都帶負極,硅鋁酸鹽Aluminosilicates,高嶺土(1:1): 水合硅鋁酸鹽Al2(Si2O5)(OH)8延展性差, 帶負極沸石粉:水

6、合硅鋁酸鹽Na2Al2Si3O10.2H2O火山灰,可能污染許多礦物質(zhì)及重金屬結(jié)構(gòu)像蜂窩-分子篩, 可吸引大小適當帶負極的分子最常用在濾水器的濾芯膨潤土 (2:1):Montmorillonites, Sodium and calcium bentonites (Na,Ca)X(Al,Mg)2Si4O10(OH)2.nH2O火山灰類的天然礦產(chǎn)水合鈣鈉硅鋁酸鹽延展性比較好,吸水后膨脹增加飼料流動性,膨潤土如何吸附黃曲霉

7、菌毒素,+,+,-,H2O: 高極性,螃蟹眼狀的結(jié)構(gòu),黃曲霉菌毒素: 唯一帶有極性的霉菌毒素,膨潤土如何吸附黃曲霉菌毒素,Divalent Interlayercations,,or,粘土類吸附劑的局限性,添加劑量高 (1-3%)吸附力取決于分子大小及帶正價的分子只能吸附帶極性的黃曲霉毒素但是也吸附礦物質(zhì), 例如錳, 鋅, 鎂 (Chestnut et al. 1992), 銅及鈉 (Kramer 1993), 尤其是使用量

8、> 0.5%對吸附嘔吐毒素, T-2毒素, 玉米赤霉烯酮 (Orr et al. 1988; Kubena et al. 1998), 赭曲霉毒素A (Huff et al. 1992), 蛇形菌毒素 (Kubena et al. 1993), 高羊茅毒素 (Chestnut et al. 1992)無效可能有二惡英(dioxins)及重金屬的污染對環(huán)保有負面的影響,吸附劑法的缺陷,酶法分解霉菌毒素,黃曲霉毒素 B1,黃曲霉

9、毒素 B2,黃曲霉毒素 G1,黃曲霉毒素 G2,黃曲霉毒素的結(jié)構(gòu)非常相似, 一種酶就可以分解所有的黃曲霉毒素,使用酶分解黃曲霉毒素,一種酶可能可以分解所有的單端孢霉烯類毒素,單端孢霉烯類毒素(Trichothecenes),需要同時含有多種的酶,但是還有其他的霉菌毒素,黃曲霉毒素萎蔫酸Penicillic AcidAlternariolFusariocinPenitremCitreoviridinFusari

10、nsPhomopsin桔霉素IslanditoxinRoridins環(huán)匹克尼酸LuteoskyrinRubratoxin嘔吐毒素串珠鐮刀菌毒素Slaframine蛇形菌毒素MonoacetoxyscirpenolDicoumarolNeosolaniolSlaframineStachbotryotoxinsErgotamine赭曲霉毒素SterigmatocystinErg

11、o ToxinsOosporeinT-2毒素FumitremorgenPaspalitremsTremorgens煙曲霉毒素Patulin玉米赤霉烯酮,還有其他300多種, 可能還有數(shù)千種未知的霉菌毒素…..,酶分解霉菌毒素的局限性,酶也是蛋白質(zhì), 活力可受pH, 溫度, 及受質(zhì)(霉菌毒素)的影響酶對受質(zhì)的選擇非常專一性, 而且專一性的程度非常高, 有時是絕對性的是否適合該種酶的作用條件，酶解后的次級產(chǎn)

12、物是否能保證沒有毒性。,酵母細胞壁提取物,,,有效成份:改性的葡聚糖,利用酵母細胞壁內(nèi)的葡萄糖甘露聚糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)與同樣屬于有機類的霉菌毒素的親和性，吸附霉菌毒素。類似于肥皂去油的原理，為表面親和吸附。,改性的葡聚糖的三維螺旋結(jié)構(gòu),改性甘露聚糖-黃曲霉毒素,黃曲霉毒素,甘露聚糖,,,,其他毒素與它的吸附方式,T2,嘔吐毒素,赭曲霉毒素,煙曲霉毒素,乳酸菌對于霉菌毒素的作用,乳酸菌對于霉菌毒素的去除的作用是目前在食品和人類營養(yǎng)方面一個嶄新的

13、課題。目前主要集中在黃曲霉毒素AFb1上。已經(jīng)有大量研究證實了一些乳酸菌能夠很好去除黃曲霉毒素，可能還有其他毒素（參見隨附的參考文獻）。,霉菌毒素檢測方法,飼料中霉菌及霉菌毒素的檢測方法主要有目測法、 薄層色譜法(T LC) 、 高效液相色譜法(HP LC) 、 酶聯(lián)免疫法(E LISA) 、 放射免疫法(KIA)及氣相色譜法等?？焖僭嚰垯z測法,薄層層析法(TLC),T LC法是我國測定食品及飼料中霉菌毒素的國家標準方法之一 ,其原

14、理是針對不同的樣品 ,用適宜的提取溶劑將霉菌毒素從樣品中提取出來 ,經(jīng)柱層析凈化 ,再在薄層板上層析展開、 分離 ,利用霉菌毒素的熒光性 ,根據(jù)熒光斑點的強弱與標準比較測定其最低含量。T LC法由于設(shè)備簡單 ,易于普及 ,所以國內(nèi)外仍在使用 ,但該法樣品前處理繁瑣 ,且提取和凈化效果不夠理想 ,提取液中雜質(zhì)較多 ,在展開時影響斑點的熒光強度 ,而雙向展開雖避免了雜質(zhì)干擾，但增加了操作步驟和時間(葉雪珠 ,2003) 。,液相色譜法(

15、HPLC),HPLC法是近幾年發(fā)展起來的檢測霉菌毒素的方法，主要是用熒光檢測器檢測 。在適宜的流動相條件下，采用反相C18柱 ，使霉菌毒素同時分離。用 HPLC 法檢測，最低檢出量0. 08 ng ，回收率為 92. 87 % 。該法快速而準確 ,但需要昂貴的儀器設(shè)備 。,酶聯(lián)免疫法(ELISA),ELISA 法是1971年提出的?；驹硎窃诤线m的載體上 ,酶標記抗體或抗原與相應(yīng)的抗原或抗體形成酶標記的抗原抗體復(fù)合物 ,在酶底物參與下

16、 ,復(fù)合物上的酶催化底物使其水解 ,氧化或還原成為另一種帶色物質(zhì)?？捎梅止夤舛扔嬤M行測定 ,從而可計算出參與反應(yīng)的抗原和抗體的含量(楊利國 ,1998) 。該免疫學(xué)方法更實際 ,其靈敏度與 TLC 或 HPLC 法相當或更高 ,因而具有更廣闊的應(yīng)用前景。該法由于快速、 靈敏、 準確、 可定量、 操作簡便、 無需貴重儀器設(shè)備 ,且對樣品純度要求不高等特性 ,特別適用于大批量樣品的檢測。,金標快速試紙條檢測原理,試劑含有被事先固定于膜上

17、測試區(qū)（T）的AFB1-BSA偶聯(lián)物和被膠體金標記的抗AFB1特異性抗體。測試時，樣品滴入試劑盒孔內(nèi)，如AFB1在樣品中濃度低于5ng/ml時，膠體金抗體不能與AFB1全部結(jié)合。這樣，膠體金抗體在層析過程中會被固定在膜上的AFB1-BSA偶聯(lián)物結(jié)合，在測試區(qū)（T）內(nèi)會出現(xiàn)一條紫紅色條帶。如果AFB1在樣品中濃度高于5ng/ml時，膠體金抗體與AFB1全部結(jié)合，從而在測試區(qū)（T）內(nèi)因為競爭反應(yīng)不會與AFB1-BSA偶聯(lián)物結(jié)合而不出現(xiàn)紫

18、紅色條帶。,檢測時間短，從樣品處理到檢測不到半小時。采用無毒無害的乙酸乙酯為霉毒素提取劑，提取時短、溶劑易于去除，改變了傳統(tǒng)脫溶劑長且污染環(huán)境和危害操作人員的健康等缺點。不需紫外光源、專用檢測儀和專業(yè)人員，適用于現(xiàn)場和基層單位。操作簡單、結(jié)果準確，可逐份檢測，故成本低。 試劑穩(wěn)定，室溫保存，有效期長（至少一年半）。,金標試紙法快速檢測的優(yōu)勢,理想的霉菌毒素吸附劑,具有吸附不同種類霉菌毒素的能力；在飼料中使用量低且有效；