細(xì)胞計(jì)數(shù)板使用方法

1、細(xì)胞計(jì)數(shù)板使用方法實(shí)驗(yàn)原理：當(dāng)待測(cè)細(xì)胞懸液中細(xì)胞均勻分布時(shí)，通過(guò)測(cè)定一定體積懸液中的細(xì)胞的數(shù)目，即可換算出每毫升細(xì)胞懸液中細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)目。具體操作：1.將計(jì)數(shù)板及蓋片擦拭干凈，并將蓋片蓋在計(jì)數(shù)板。2.將細(xì)胞懸液吸出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿蓋片和計(jì)數(shù)板之間，靜置3min，注意蓋片下不要有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中。3.計(jì)算板四大格細(xì)胞總數(shù)，壓線細(xì)胞只計(jì)左側(cè)和上方的。然后按公式計(jì)算：細(xì)胞數(shù)mL=四大格細(xì)胞總數(shù)4104說(shuō)明：公式中

2、除以4，因?yàn)橛?jì)數(shù)了4個(gè)大格的細(xì)胞數(shù)。公式中乘以104因?yàn)橛?jì)數(shù)板中每一個(gè)大格的體積為：1.0mm（長(zhǎng)）1.0mm（寬）0.1mm（高）=0.1mm3而1ml=1000mm3（注意：鏡下偶見(jiàn)有兩個(gè)以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán)，應(yīng)按單個(gè)細(xì)胞計(jì)算，若細(xì)胞團(tuán)10%以上，說(shuō)明分散不好，需重新制備細(xì)胞懸液）細(xì)胞計(jì)數(shù)板的使用細(xì)胞計(jì)數(shù)板的使用血球計(jì)數(shù)板血球計(jì)數(shù)板基本構(gòu)造基本構(gòu)造血球計(jì)數(shù)板是一塊特制的厚型載玻片，載玻片上有四個(gè)槽構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)。中間的平臺(tái)較寬，其中間

3、又被一短橫槽分隔成兩半，每個(gè)半邊上面各刻有一小方格網(wǎng)，每個(gè)方格網(wǎng)共分九個(gè)大格，中央的一大格作為計(jì)數(shù)用，稱為計(jì)數(shù)區(qū)。計(jì)數(shù)區(qū)的刻度有兩種：一種是計(jì)數(shù)區(qū)分為16個(gè)大方格（大方格用三線隔開(kāi)），而每個(gè)大方格又分成25個(gè)小方格；另一種是一個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)分成25個(gè)大方格（大方格之間用雙線分開(kāi)），而每個(gè)大方格又分成16個(gè)小方格。但是不管計(jì)數(shù)區(qū)是哪一種構(gòu)造，它們都有一個(gè)共同特點(diǎn)，即計(jì)數(shù)區(qū)都由400個(gè)小方格組成。6對(duì)于出芽的酵母菌，芽體達(dá)到母細(xì)胞大小一半時(shí)，即可

4、作為兩個(gè)菌體計(jì)算。每個(gè)樣品重復(fù)計(jì)數(shù)23次（每次數(shù)值不應(yīng)相差過(guò)大，否則應(yīng)重新操作），按公式計(jì)算出每mL（g）菌懸液所含細(xì)胞數(shù)量。7測(cè)數(shù)完畢，取下蓋玻片，用水將細(xì)胞計(jì)數(shù)板沖洗干凈，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免損壞網(wǎng)格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干，放入盒內(nèi)保存。細(xì)胞計(jì)數(shù)板細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)公式計(jì)數(shù)公式1、16格25格的細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)算公式：細(xì)胞數(shù)ml=100小格內(nèi)細(xì)胞個(gè)數(shù)10040010000稀釋倍數(shù)1、25格16格的細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)算公式：細(xì)胞數(shù)

5、ml=80小格內(nèi)細(xì)胞個(gè)數(shù)8040010000稀釋倍數(shù)血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的誤差主要來(lái)自哪些方面血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的誤差主要來(lái)自哪些方面應(yīng)如何盡量減少誤差應(yīng)如何盡量減少誤差力求準(zhǔn)確力求準(zhǔn)確血細(xì)胞計(jì)數(shù)的誤差分別來(lái)源于技術(shù)誤差和固有誤差。其中由于操作人員采血不順利，器材處理、使用不當(dāng)，稀釋不準(zhǔn)確，細(xì)胞識(shí)別錯(cuò)誤等因素所造成的誤差屬技術(shù)誤差；而由于儀器（計(jì)數(shù)板、蓋片、吸管等）不夠準(zhǔn)確與精密帶來(lái)的誤差稱儀器誤差，由于細(xì)胞分布不均勻等因素帶來(lái)的細(xì)胞計(jì)數(shù)誤差

6、屬于分布誤差或計(jì)數(shù)域誤差（filederr）。儀器誤差和分布誤差統(tǒng)稱為固有誤差或系統(tǒng)誤差。技術(shù)誤差和儀器誤差可通過(guò)規(guī)范操作、提高熟練程度和校正儀器而避免或糾正，但細(xì)胞分布誤差卻難于徹底消除。因此，搞好紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的質(zhì)量控制一般需采用以下措施。1避免技術(shù)誤差，糾正儀器誤差（1）所用器材均應(yīng)清潔干燥，計(jì)數(shù)板、血蓋片、微量吸管及刻度吸管的規(guī)格應(yīng)符合要求或經(jīng)過(guò)校正。①計(jì)數(shù)板的鑒定：要求計(jì)數(shù)室的臺(tái)面光滑、透明，劃線清晰，計(jì)數(shù)室劃線面積準(zhǔn)確。必要時(shí)采

7、用嚴(yán)格校正的目鏡測(cè)微計(jì)測(cè)量計(jì)數(shù)室的邊長(zhǎng)與底面積，用微米千分尺測(cè)量計(jì)數(shù)室的深度。美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)局（NBS）規(guī)定每個(gè)大方格邊長(zhǎng)的誤差應(yīng)小于1%，即10.01mm，深度誤差應(yīng)小于2%，即0.10.002mm。若超過(guò)上述標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)棄之不用。②血蓋片應(yīng)具有一定的重量，平整、光滑、無(wú)裂痕，厚薄均勻一致，可使用卡尺多點(diǎn)測(cè)量（至少在9個(gè)點(diǎn)），不均勻度在0.002mm之內(nèi)。必要時(shí)采用平面平行儀進(jìn)行測(cè)量與評(píng)價(jià)，要求呈現(xiàn)密集平行的直線干涉條紋。最簡(jiǎn)單的評(píng)價(jià)方法是

8、將潔凈的蓋片緊貼于干燥的平面玻璃上，若能吸附一定的時(shí)間不脫落，落下時(shí)呈弧線形旋轉(zhuǎn)，表示蓋片平整、厚薄均勻。同時(shí)，合格的蓋片放置在計(jì)數(shù)室表面后，與支持柱緊密接觸的部位可見(jiàn)到彩虹。精選出的蓋片與其他蓋片緊密重合后，在掠射光線下觀察，如見(jiàn)到完整平行的彩虹條紋表示另一枚蓋片質(zhì)量也符合要求。③目前臨床實(shí)驗(yàn)室多采用一次性微量采血管采集毛細(xì)血管血，除注意定點(diǎn)購(gòu)買使用信譽(yù)較好廠家的產(chǎn)品外，還應(yīng)對(duì)每一批量的采血管進(jìn)行抽樣檢查，可通過(guò)水銀稱重法或有色溶液比