大鼠乙型流感病毒酶聯(lián)免疫分析

1、大鼠乙型流感病毒大鼠乙型流感病毒酶聯(lián)免疫分析酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。96T使用目的：使用目的：本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中乙型流感病毒表達。實驗原理實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠乙型流感病毒表達。用純化的大鼠乙型流感病毒抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中乙型流感病毒相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標記的乙型流感病毒抗體結(jié)合，形成抗體抗原

2、酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中大鼠乙型流感病毒的存在與否。試劑盒組成試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml1瓶7終止液6ml1瓶2酶標試劑6ml1瓶8陽性對照0.5ml1瓶3酶標包被板12孔8條9陰性對照0.5ml1瓶4樣品稀釋液6ml1瓶10說明書1份5顯色劑A液6m

3、l1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml1瓶12密封袋1個標本要求標本要求1標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟操作步驟1.編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）2.加樣：分別在陰

4、、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。7.溫育：操作同3。8.洗滌

5、：操作同5。9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。計算和結(jié)果判定：計算和結(jié)果判定：試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00陰性對照平均值≤0.10臨界值（CUTOFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值0.15陰

6、性判定：樣品OD值臨界值（CUTOFF）者為大鼠乙型流感病毒陰性陽性判定：樣品OD值≥臨界值（CUTOFF）者為大鼠乙型流感病毒陽性。注意事項注意事項1操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。2試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡1530分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。3濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。4封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5底物請避光保