熒光光度法測定血清中堿性磷酸酶

1、熒光光度法測定血清中堿性磷酸酶熒光光度法測定血清中堿性磷酸酶首席醫(yī)學網(wǎng)2009年05月20日13:47:33Wednesday237?中華臨床醫(yī)師雜志征稿?顱腦解剖技術研修班?肝病學科新進展研修班?心律失?，F(xiàn)代診療會議?醫(yī)學類核心期刊征稿?老年疾病循證應用會議?小兒心血管疾病會議?第13屆國際急診學大會?臨床檢驗及設備展覽會?白內(nèi)障人工晶狀體會議?全國疑難重癥肝病大會?四屆長城國際男科論壇?2010世界心臟病學大會?泌尿外科學臨床研修班

2、?股骨頭壞死修復論壇作者：張娜邊瑋瑋李耀輝作者單位：黃山學院化學系，黃山245041濰坊醫(yī)學院，濰坊261041加入收藏夾《航空航天醫(yī)藥》由中華人民共和國科學技術部、...中華現(xiàn)代臨床護理學雜志征稿[吸入性肺炎常規(guī)治療7例][新生兒溶血病]60例肝癌介入術后并發(fā)癥的觀察和護理2型糖尿病患者自主神經(jīng)病變與血糖控制淺談局部壓迫治療小腿淋巴漏的臨床體會RF540型熒光分光光度計和UV265型紫外可見分光光度計（日本島津公司）；PHS3

3、B型酸度計（上海雷磁儀器廠）；離心機（上海手術機械廠）。2.2試劑水楊酸磷酸酯(SP)參照文獻[15]合成并純化，將10.0gSA與15.0gPCl5混合使之在室溫下反應，直到反應平緩下來，然后用60～65℃水浴攪拌加熱1.5h。用冰水浴將反應混合物冷卻，然后依次加入25mL苯、25mL丙酮和3.5mL水。將混合物冰水冷卻30min后，加入50mL苯，再放置24h。經(jīng)真空干燥過夜后，用丙酮和苯的混合物重結晶，可得7.99gSP（產(chǎn)率約5

4、1%）。測得其熔點為163～165℃，與文獻[15]報道的162.5～163℃基本符合。底物C、H含量用元素分析儀（美國PE2400）測定（%，括號為理論值）：測得值為：C38.50（38.54）H3.26（3.24）。工作液的配制：準確稱取0.1090gSP，溶于少量0.10molLTrisHCl緩沖溶液(pH9.0)中，并以此緩沖溶液定容至500mL容量瓶，得1.00mmolL工作液（可穩(wěn)定一個月以上）。堿性磷酸酶(ALP，分析

5、純，Sigma公司，17Umg)儲備液的配制：準確稱取0.0441gALP，溶于少量0.10molLTrisHCl緩沖溶液(pH=9.0)中，并以此緩沖溶液定容至250mL容量瓶，得3.00UmL儲備液。使用時以0.10molLTrisHCl緩沖溶液(pH9.0)逐級稀釋得工作液。水楊酸(SA，分析純，北京化學試劑公司)工作液的配制：準確稱取0.0691gSA，溶于少量0.10molLTrisHCl緩沖溶液(pH9.0)中，并以此

6、緩沖溶液定容至500mL容量瓶，得1.00mmolL工作液。儲備液與工作液均需置于0～4℃的生化培養(yǎng)箱內(nèi)保存。0.10molLTrisHCl緩沖溶液(pH9.0)。其余所用試劑均為分析純，所有實驗用水均為石英亞沸蒸餾水。2.3實驗方法于10mL比色管中依次加入1.0mL1.00mmolLSP、2.0mLTrisHCl緩沖溶液(pH9.0)和0.10mL0.30ULALP，以石英亞沸蒸餾水定容至刻度，振蕩搖勻，37.0℃水浴放置10m

7、in，用1cm熒光池（附有自動恒溫裝置），記錄其熒光光譜。同時在λexλem=303412nm測定熒光強度F，同時測定試劑空白的熒光強度F0。經(jīng)過酶反應后，增強的熒光強度以ΔF（ΔF=F－F0）表示。3結果與討論結果與討論3.1ＳＡ和ＳＰ的熒光光譜SA溶液、SP溶液和SPALP混合后體系的熒光激發(fā)光譜和發(fā)射光譜見圖1。酶反應后所得產(chǎn)物SA分子具有強的共軛π鍵，剛性結構以及給電子基團(OH)，因此SA熒光較強。合成的SP將SA分子中的給