順序注射熒光法測定堿性磷酸酶及其應用.pdf

1、堿性磷酸酶(ALP)是一種廣泛存在于人體、動物、植物及微生物體內的膜結合蛋白，在堿性條件下具有催化活性。堿性磷酸酶活性檢測在食品檢驗以及臨床診斷方面具有十分重要的作用。高度自動化、程序化的順序注射技術不僅能夠精確控制反應條件，而且還能有效降低試劑試樣的消耗，在與酶促反應相關研究中逐漸引起關注。本實驗是以堿性磷酸酶為研究對象，建立以順序注射為基礎的酶法分析系統(tǒng)，進而應用于實際樣品的即時評價。主要工作有以下兩方面：
　　 1.以4-

2、甲基傘形酮磷酸酯(4-MUP)為底物，建立了堿性磷酸酶的順序注射熒光分析系統(tǒng)。在系統(tǒng)內進行了試劑試樣濃度、取樣體積、反應時間、流速等影響酶促反應的因素的優(yōu)化，并對檢測堿性磷酸酶的性能進行了評價。結果表明，堿性磷酸酶在50～1000mU/L的活性范圍內有較好的線性范圍，其回歸方程為△F=143.4CALP+6.859(r2=0.9988)；根據(jù)IUPAC推薦的方法計算出檢出限為14 mU/L；對200 mU/L ALP標液進行11次測定得

3、到了方法相對標準偏差RSD為2.3％；試劑消耗量低，試樣與底物消耗的體積分別為20μL、40μL；操作簡單、分析速度快以及自動化程度高，分析頻率為15 h-1。
　　 2.牛乳制品中含有一定量的堿性磷酸酶，其熱穩(wěn)定性比病原菌要高，因此，堿性磷酸酶活性可以作為巴氏消毒水平的評價指標。本實驗將上述建立的順序注射熒光法應用于鮮奶和巴氏牛奶中堿性磷酸酶活性檢測并進行了加標回收實驗，結果表明該方法準確度較高，能夠評價牛奶巴氏滅菌水平。與I