效應(yīng)物對(duì)鮑魚(yú)堿性磷酸酶活力的影響.pdf

1、鮑魚(yú)是我國(guó)南方海珍品的主要養(yǎng)殖種類(lèi)，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和藥用價(jià)值。堿性磷酸酶(Alkaline Phosphatase，簡(jiǎn)稱(chēng)ALPase，EC 3.1.3.1)是鮑魚(yú)重要的代謝酶之一，與鮑魚(yú)的生長(zhǎng)發(fā)育密切相關(guān)。本文主要研究磷酸鹽(NazitP04)及其類(lèi)似物(Na<,2>HAsO<,4>和Na<,3>Wo<,4>)，二巰基蘇糖醇(DTT)與巰基乙醇(ME)兩種巰基化合物，甲酰胺、丙烯酰胺、二甲基甲酰胺、二甲亞砜(DMSO)、二氧六環(huán)等有

2、機(jī)溶劑，過(guò)氧釩配合物等多種環(huán)境污染物對(duì)酶活力的影響及抑制動(dòng)力學(xué)，探討堿性磷酸酶與鮑魚(yú)生長(zhǎng)及發(fā)病的關(guān)系，為人工養(yǎng)殖鮑魚(yú)提供一些有益的參考信息。 研究效應(yīng)物對(duì)酶的作用結(jié)果表明： 1．酶在二甲基甲酰胺、二甲亞砜(DMSO)、二氧六環(huán)等有機(jī)溶劑，磷酸鹽及其類(lèi)似物，巰基化合物(DTTFT/ME)，過(guò)氧釩配合物溶液中，均有不同程度的失活作用，而且為可逆的反應(yīng)。分別檢測(cè)它們對(duì)該酶的失活作用機(jī)理，得知磷酸鹽及其類(lèi)似物、過(guò)氧釩配合物中的

3、聯(lián)吡啶過(guò)氧釩酸鈉[PV(bipy)]與鄰二氮雜菲過(guò)氧釩酸鉀[PV(phen)] 對(duì)鮑魚(yú)ALPase的失活作用是競(jìng)爭(zhēng)性抑制，巰基化合物(DTT和ME)、二氧六環(huán)的是非競(jìng)爭(zhēng)性抑制，二甲基甲酰胺、二甲亞砜和過(guò)氧釩配合物中的過(guò)氧釩酸鉀[PV(ox)] 的是混合型抑制。 2．采用鄒氏方法分別研究巰基化合物(DTT／ME)等對(duì)酶的抑制作用動(dòng)力學(xué)，建立動(dòng)力學(xué)模型，測(cè)定抑制劑與游離酶(E)和酶-底物絡(luò)合物(ES)結(jié)合的微觀速度常數(shù)，并加于比較

4、，證明底物對(duì)酶的抑制作用有明顯的保護(hù)作用。 3．應(yīng)用熒光光譜、紫外吸收光譜研究鮑魚(yú)ALPase經(jīng)二甲亞砜微擾后的分子構(gòu)象變化，說(shuō)明二甲亞砜對(duì)酶構(gòu)象有顯著的影響。 4．以SDS為變性劑，研究對(duì)鮑魚(yú)ALPase活力的影響，發(fā)現(xiàn)該酶活性中心對(duì)SDS 變性劑并不敏感，說(shuō)明鮑魚(yú)ALPase對(duì)SDS具有高度的耐受性。 5．研究酶的熱穩(wěn)定性，結(jié)果表明酶在50℃以下較為穩(wěn)定，55℃以上開(kāi)始熱變性。在65℃處理30 min后