合浦珠母貝堿性磷酸酶的分離純化和性質(zhì)研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、以合浦珠母貝(PinctadaFucata)的外套膜和內(nèi)臟團為提酶材料,經(jīng)Tris-HCI緩沖液(pH8.9)抽提,正丁醇處理,硫酸銨分級分離獲得粗酶制劑,進(jìn)一步經(jīng)過SephadexG-150凝膠過濾柱層析,DEAE-32離子交換柱層析等純化,獲得電泳和層析單一純的堿性磷酸酶制劑,比活力達(dá)8723unit/mg.測定酶的分子量為85.5kD,是由兩個分子量為43kD的相同的亞基組成.該酶對底物pNPP的水解反應(yīng)的最適溫度是45℃,最適p

2、H為9.72,活化能為20.14kJ·mol<'1>,初速度為6.1μmol·L<'-1>·min<'-1>.米氏常數(shù)K<,m>為2.86mmpl/L,最大反應(yīng)速度V<,m>為9.09μmol/(L·min).研究鹽酸胍對酶的失活動力學(xué),發(fā)現(xiàn)經(jīng)過鹽酸胍預(yù)處理24h的酶是不可逆失活,整個動力學(xué)模型呈不可逆的競爭性抑制.研究插核對合浦珠母貝外套膜上堿性磷酸酶比活力的影響,結(jié)果表明,開始由于創(chuàng)傷,該酶比活力下降,而后開始提高,可見在珍珠質(zhì)形成

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