小蔥酸性磷酸酶的分離純化及性質(zhì)和功能基團(tuán)研究.pdf

1、酸性磷酸酶(Acidphospoatase，簡(jiǎn)稱ACP，E.C.3.1.3.2)，是一種在酸性條件下催化磷酸單酯水解釋放出無(wú)機(jī)磷的巰基酶。在植物中，酸性磷酸酶直接參與磷的代謝轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程，對(duì)植物形成良好根態(tài)結(jié)構(gòu)，適應(yīng)低磷脅迫具有重要作用。臨床上將血清中ACP水平變化作為診斷前列腺癌、子宮頸癌、胃癌、脊髓損傷等疾病的重要指標(biāo)。在環(huán)境污染監(jiān)測(cè)中，以ACP水平變化來(lái)作為指標(biāo)。因此近年來(lái)酸性磷酸酶引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛重視。到目前為止，已有多種來(lái)源的

2、酸性磷酸酶得到了詳細(xì)研究，但未見小蔥酸性磷酸酶的研究報(bào)道。因此，本文以廉價(jià)、來(lái)源廣泛的小蔥為實(shí)驗(yàn)材料，對(duì)酸性磷酸酶進(jìn)行了分離純化以及部分酶學(xué)性質(zhì)研究，旨在為酸性磷酸酶的深入應(yīng)用研究提供了更多的數(shù)據(jù)支持。其結(jié)果如下:
　　 1.小蔥酸性磷酸酶的分離純化
　　 新鮮小蔥通過(guò)去根，勻漿、硫酸銨沉淀、CM-Sepharose離子交換層析以及Superdex-200凝膠過(guò)濾層析等方法，獲得了電泳純的小蔥酸性磷酸酶。其回收率為8.0

3、％，純化倍數(shù)為234.1倍，酶比活力為527.4U/mg。
　　 2.小蔥酸性磷酸酶的性質(zhì)研究
　　 小蔥酸性磷酸酶的全酶亞基相對(duì)分子質(zhì)量和相對(duì)分子質(zhì)量分別為59.6kD和57.8kD，推測(cè)該酶可能由單亞基組成。它的最適反應(yīng)溫度為50℃，最適pH值為5.4。該酶的穩(wěn)定性不是太好，其對(duì)對(duì)硝基苯磷酸二鈉的表觀Km值為3.63mmol/L。
　　 3.有機(jī)溶劑、化學(xué)試劑及金屬離子對(duì)小蔥酸性磷酸酶的影響
　　 甲

4、醇、乙醇、異丙醇等對(duì)該酶有較強(qiáng)的抑制作用，10％的甘油對(duì)其具有激活作用，抗壞血酸，過(guò)氧化氫對(duì)其具有抑制作用，抗壞血酸的抑制作用比較大，而EDTA和尿素對(duì)該酶則表現(xiàn)出一定的激活作用。Ca2+、Ag+、Zn2+、Cu2+、Co2+、Pb2+對(duì)小蔥酸性磷酸酶的抑制作用比較強(qiáng)，Cu2+對(duì)其影響最大，最終都使酶幾乎完全失活，而K+、Mg2+對(duì)酸性磷酸酶的抑制作用不是很明顯，Mn2+低濃度對(duì)酶的抑制作用比較大，高濃度對(duì)其抑制作用減少。