11植物根系酸性磷酸酶活性測定

1、植物根系酸性磷酸酶活性測定1. 原理該方法以對硝基苯磷酸二鈉（即p-NPP）為底物，該底物在土壤酸性磷酸酶的催化 下水解生成黃色的對硝基苯酚（即p-NP），該黃色溶液在410nm處有最大吸收光值，根 據(jù)對硝基苯酚的生成數(shù)量與黃色溶液的吸光度呈正比來進行定量分析，以此來反映土壤 酸性磷酸酶的活性。酶活性是以單位時間內(nèi)單位重量鮮根或單株根系水解p-NPP生成的 對硝基苯酚（p-NP）的量來表示（pg?h-i?g-1鮮根或pghi/株）。2.

2、 測定方法1）稱?。?.2±0.1）g鮮根，加入8 mL 0.2mol/L醋酸鈉緩沖液（pH 5.8），然后進行冰浴 研磨，雙層紗布過濾，12000 r/min離心15min，靜置。2）取上清液1mL于15mL離心管中，加入2mL 0.05mol/L對硝基苯磷酸二鈉（醋酸鈉 緩沖液配制），搖勻后加蓋，于37°C水浴30min。3）水浴后加入2mL 0.5mol/L CaC^及.2mL 2mol/L NaOH以終止反應

3、，搖勻。4）2500r/min離心5min，取上清液于15mL離心管中，4000r/min下再離心5min。5）取上清液在410nm波長比色，并記錄吸光值人們。。3. 標準曲線的制作1）取13支15mL離心管，按順序編號，并按表1加入試劑。表1對硝基苯酚標準曲線配制表離心管號 0 1 2 3 4 5 60.005^mol/mL pNP(mL)0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06H2O (mL) 0.8 0.79

4、 0.78 0.77 0.76 0.75 0.74pNP 含量(pmol) 0 0.00005 0.0001 0.00015 0.0002 0.00025 0.0003離心管號 7 8 9 10 11 120.005^mol/mL pNP(mL)0.07 0.08 0.09 0.10 0.11 0.12H2O (mL) 0.73 0.72 0.71 0.70 0.69 0.68pNP 含量(pmol) 0.00035 0.0004 0.

5、00045 0.0005 0.00055 0.0006搖勻0.2mol/L pH6.5醋酸鈉緩沖液 80.5mol/L CaCl2 （mL） ____________________________22mol/L NaOH （mL） | 22）混勻后，在2500r/min下離心5min,再在4000r/min下離心5min以0號作為對照， 在410nm波長下測光吸收值，并記錄光吸收值A410。3）以吸光值為橫坐標、對硝基苯酚的含量為縱

6、坐標計算直線回歸方程y=a+bx及相 關系數(shù)R，即對硝基苯酚含量n（ R mol） = a + b x氣蒞4. 計算方法根系酸性磷酸酶活性是以單位時間內(nèi)單位重量鮮根或單株根系水解p-NPP生成的對 硝基苯酚（p-NP）的量來表示（pg?h-i?g-1鮮根或pghi/株）。即根系酸性磷酸酶活性3g - h-i - g-1鮮根）=n xM x稀釋倍數(shù)（（ W x t）式中：n—標準曲線上查得樣品中對硝基苯酚的濃度（gmol）；M一對硝基苯酚