一株產(chǎn)堿性磷酸酶菌株的分離鑒定及發(fā)酵條件研究.pdf

1、堿性磷酸酶(Alkal ine phosphatase，EC3.1.3.1，簡(jiǎn)稱(chēng)ALP)是一種底物專(zhuān)一性較低的、裂解有機(jī)磷化合物釋放無(wú)機(jī)磷的磷酸單脂酶。堿性磷酸酶在酶聯(lián)免疫測(cè)定、生物傳感器、非同位素探針、雜交和測(cè)序方面有廣泛應(yīng)用。在分子生物學(xué)方面，堿性磷酸酶分解核酸的末端磷酸鹽，是遺傳工程的有用工具酶。堿性磷酸酶還在有機(jī)磷農(nóng)藥降解中起到非常重要的作用。 堿性磷酸酶主要存在于人體、動(dòng)物、植物和微生物中。目前商業(yè)堿性磷酸酶大多產(chǎn)自動(dòng)

2、物體(小牛腸堿性磷酸酶)或植物體(麥芽)，產(chǎn)率低，價(jià)格昂貴；有些熱穩(wěn)定性差，使它的使用受到了限制。為了獲得具有自主產(chǎn)權(quán)的產(chǎn)率高、熱穩(wěn)定性好的堿性磷酸酶，本研究從32株細(xì)菌中分離篩選到一株熱穩(wěn)定性較好的產(chǎn)堿性磷酸酶的菌株HB1，對(duì)其進(jìn)行了鑒定，并進(jìn)一步研究了該菌株的產(chǎn)酶條件，主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1.產(chǎn)堿性磷酸酶茵株的分離、篩選從土壤分離的(12株)和浙江大學(xué)應(yīng)用微生物學(xué)研究室已有保存菌株(20株)共32株菌中用微孔板法初篩，獲得三

3、株堿性磷酸酶活性較高的菌株HB1、1靜、B7。磷酸苯二納法測(cè)酶活復(fù)篩后確定菌株HBI產(chǎn)酶活性最高。該菌株主要產(chǎn)胞外堿性磷酸酶，并發(fā)現(xiàn)該酶具有較好的熱穩(wěn)定性。 2.產(chǎn)酶菌株的鑒定通過(guò)對(duì)菌株HB1的形態(tài)學(xué)觀察，生理生化特性測(cè)定，DNA中G+C mol％含量，16S rDNA測(cè)序和比對(duì)分析，確定菌株HBI屬于芽胞桿菌屬(Bacilus.sp)的一個(gè)種。 3.菌株HB1產(chǎn)酶發(fā)酵條件的優(yōu)化用搖瓶批量發(fā)酵法測(cè)得HB1發(fā)酵的最佳培養(yǎng)基