一株產(chǎn)肌酸水解酶菌的分離、發(fā)酵條件及酶的提純與特性研究.pdf

1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文一株產(chǎn)肌酸水解酶菌的分離、發(fā)酵條件及酶的提純與特性研究姓名：王園園申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：馬曉航2002.5.1微生物學(xué)碩士畢業(yè)論文摘要摘要暖7夠本研究分離了一株產(chǎn)肌酸水解酶的菌株，對(duì)該菌株進(jìn)行了鑒定，研究了分離菌株的發(fā)酵產(chǎn)酶條件，對(duì)肌酸水解酶進(jìn)行了提純，并研究了酶的性質(zhì)。產(chǎn)肌酸水解醇微生物的分離及鑒定本研究用恒化培養(yǎng)的方法從土壤中富集微生物，然后再用平板劃線分離。經(jīng)過(guò)多次富集分離共得到了7株產(chǎn)肌酸

2、水解酶的細(xì)菌(D—B1、A1l、El、F3、WBI、WHI、WB2)，它們都能利用肌酸發(fā)酵產(chǎn)酶。通過(guò)比較酶的熱穩(wěn)定性，選定菌株WBl作進(jìn)一步研究。對(duì)它的形態(tài)、生理生化及DNAGCM01％進(jìn)行研究比較，該菌株暫定為施氏假單胞菌(Pseudomonasstutzeri)。2、產(chǎn)酶條件菌株WBl發(fā)酵產(chǎn)酶的最適pH為75～8O；最適溫度為304C。最佳氮源為玉米漿和蛋白胨，最佳比例為2：3，最佳濃度為16％：加入其它碳源時(shí)有助于菌株穩(wěn)定產(chǎn)酶；1

3、00ml搖瓶的最佳裝液量為15ml；肌酸、肌氨酸和氯化膽堿都能誘導(dǎo)菌株產(chǎn)酶，其中肌酸誘導(dǎo)產(chǎn)酶的效果最好，而肌酐和尿素不能誘導(dǎo)菌株產(chǎn)酶：誘導(dǎo)物肌酸的最適加入時(shí)間為接種培養(yǎng)12小時(shí)后，最適加入量為075％。3、肌酸永解酶的提純酶在硫酸銨飽和度為4080％之間完全沉淀，先后經(jīng)過(guò)DEAECellulose離子層析柱、ToyopearlHW65疏水層析柱、SephadexG200分子篩層析柱層析，最終使酶提純10倍，最終得率為174％。PAGE顯