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文檔簡介
1、1生物選修三易考知識點背誦專題專題1基因工程基因工程基因工程的概念基因工程是指按照人們的愿望,進行嚴格的設計,通過體外體外DNADNA重組和轉基因技術重組和轉基因技術,賦予生物以新的遺傳特性新的遺傳特性,創(chuàng)造出更符合人們需更符合人們需要的新的生物類型和生物產品要的新的生物類型和生物產品?;蚬こ淌窃贒NADNA分子水平分子水平上進行設計和施工的,又叫做DNDNA重組技術重組技術。(一)基因工程的基本工具1.“分子手術刀”——限制性核酸內
2、切酶(限限制性核酸內切酶(限制酶)制酶)(1)來源:主要是從原核生物原核生物中分離純化出來的。(2)功能:能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定特定的核苷酸序列,并且使每一條鏈中特定特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵斷開,因此具有專一專一性。(3)結果:經限制酶切割產生的DNA片段末端通常有兩種形式:黏性末端黏性末端和平末端平末端。2.“分子縫合針”——DNADNA連接酶連接酶(1)兩種DNA連接酶(EcoliDNA連接酶和T4D
3、NA連接酶)的比較:①相同點:都縫合磷酸二酯磷酸二酯鍵。②區(qū)別:EcoliDNA連接酶來源于T4噬菌體噬菌體,只能將雙鏈DNA片段互補的黏性末端黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來;而T4DNA連接酶能縫合兩種兩種末端末端,但連接平末端的之間的效率較低較低。(2)與DNA聚合酶作用的異同:DNA聚合酶只能將單個核苷酸單個核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯鍵。DNA連接酶是連接兩個兩個DNADNA片段片段的末端,形成磷酸二酯鍵。3
4、.“分子運輸車”——載體載體(1)載體具備的條件:①能在受體細胞中復制并穩(wěn)定保存能在受體細胞中復制并穩(wěn)定保存。②具有一至多個限制酶切點,供外源具有一至多個限制酶切點,供外源DNADNA片段片段插入插入。③具有標記基因,供重組具有標記基因,供重組DNADNA的鑒定和選擇的鑒定和選擇。(2)最常用的載體是質粒質粒,它是一種裸露裸露的、結構簡單的、獨立于細菌染色體之外,并的、結構簡單的、獨立于細菌染色體之外,并具有自我復制能力的雙鏈環(huán)狀具有自
5、我復制能力的雙鏈環(huán)狀DNADNA分子分子。(3)其它載體:噬菌體的衍生物、動植物病噬菌體的衍生物、動植物病毒。毒。(二)基因工程的基本操作程序第一步:目的基因的目的基因的獲取1.目的基因是指:編碼蛋白質的結構基因編碼蛋白質的結構基因。2.原核基因采取直接分離直接分離獲得,真核基因是人工合成工合成。人工合成目的基因的常用方法有反轉錄法轉錄法_和化學合成法化學合成法_。3.PCR技術擴增目的基因(1)原理:DNADNA雙鏈復制雙鏈復制(2)
6、過程:第一步:加熱至90~95℃DNADNA解鏈解鏈;第二步:冷卻到55~60℃,引物結合到互補引物結合到互補DNANA鏈;第三步:加熱至70~75℃,熱穩(wěn)定熱穩(wěn)定DNADNA聚合酶聚合酶從引物起始互補鏈的合成從引物起始互補鏈的合成。第二步:基因表達基因表達載體的構建體的構建1.目的:使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在穩(wěn)定存在,并且可以遺傳至下一代遺傳至下一代,使目的基因能夠表達表達和發(fā)揮作用和發(fā)揮作用。2.組成:目的基因目的基因+啟動子啟
7、動子+終止子終止子+標記基標記基因(1)啟動子:是一段有特殊結構的DNADNA片段,位于基因的首端首端,是RNARNA聚合酶聚合酶識別和結合的部位,能驅動基因轉錄出轉錄出mRNAmRNA,最終獲得所需的蛋白質蛋白質。31.理論基礎(原理):細胞全能性細胞全能性全能性表達的難易程度:受精卵>生殖細受精卵>生殖細胞>干細胞>體細胞胞>干細胞>體細胞;植物細胞>動物細胞植物細胞>動物細胞2.植物組織培養(yǎng)技術(1)過程:離體離體的植物器官、組織
8、或細胞―→愈傷組愈傷組織―→試管苗―→植物體(2)用途:微型繁殖、作物脫微型繁殖、作物脫毒、制造人工種子、單毒、制造人工種子、單倍體育種、細胞產物的倍體育種、細胞產物的工廠化生產工廠化生產。(3)地位:是培育轉基因植轉基因植物、植物體細胞雜交植物體細胞雜交培育植物新品種的最后一道工序。3.植物體細胞雜交技術(1)過程:(2)誘導融合的方法:物理法包括離心、振離心、振動、電刺激動、電刺激等。化學法一般是用聚乙二醇(聚乙二醇(PEPEG)作
9、為誘導劑。(3)意義:克服了遠緣雜交不親和的障礙??朔诉h緣雜交不親和的障礙。(二)動物細胞工程1.動物細胞培養(yǎng)(1)概念:動物細胞培養(yǎng)就是從動物機體中取出相關的組織組織,將它分散成單個細胞單個細胞,然后放在適宜的培養(yǎng)基培養(yǎng)基中,讓這些細胞生長和繁殖生長和繁殖。(2)動物細胞培養(yǎng)的流程:取動物組織塊(動物胚胎或幼動物胚胎或幼齡動物的器官或組織齡動物的器官或組織)→剪碎→用胰蛋白酶或膠原蛋白酶胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞單個細胞
10、→制成細胞懸液細胞懸液→轉入培養(yǎng)瓶中進行原代原代培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞繼續(xù)傳代傳代培養(yǎng)。(3)細胞貼壁和接觸抑制:懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上貼附在瓶壁上,稱為細胞貼壁細胞貼壁。細胞數(shù)目不斷增多,當貼壁細胞分裂生長到表面相互抑制相互抑制時,細胞就會停止停止分裂增殖分裂增殖,這種現(xiàn)象稱為細胞的接觸抑制細胞的接觸抑制。(4)動物細胞培養(yǎng)需要滿足以下條件:①無菌、無毒的環(huán)境無菌、無毒的環(huán)境:培養(yǎng)
11、液應進行無菌無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素抗生素,以防培養(yǎng)過程中的污染。此外,應定期更換培養(yǎng)液,防止代謝產代謝產物積累對細胞自身造成危害物積累對細胞自身造成危害。②營養(yǎng)營養(yǎng):合成培養(yǎng)基成分:糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等。通常需加入血清、血清、血漿血漿等天然成分。③溫度溫度:適宜溫度:哺乳動物多是36.536.5℃+℃+0.0.5℃;pH:7.27.2~7.47.4。④氣體環(huán)境氣體環(huán)境:95%空氣+5%CO2
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