槐米中蘆丁的提取和精制(2010)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、1實(shí)驗(yàn)一、槐米中蘆丁的提取、精制和鑒定實(shí)驗(yàn)一、槐米中蘆丁的提取、精制和鑒定（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊螅ㄒ唬?shí)驗(yàn)?zāi)康囊?.制備蘆丁，供藥用。2.通過蘆丁的制備，掌握黃酮類化合物的提取分離的原理和操作。3.熟悉重結(jié)晶技巧。4.了解和掌握黃酮類化合物的一些主要性質(zhì)和鑒定方法。（二）實(shí)驗(yàn)的基本原理（二）實(shí)驗(yàn)的基本原理1.蘆丁的提取原理蘆丁的提取原理利用蘆丁結(jié)構(gòu)中含有多個(gè)酚羥基，呈酚酸性，能在堿水中溶解的性質(zhì)，可用堿性溶劑進(jìn)行提取，提取液加酸后可沉淀析

2、出（堿溶酸沉法）。也可利用蘆丁在冷水中溶解度小，在熱水中溶解度大的性質(zhì)進(jìn)行提取。2.蘆丁的分離原理蘆丁的分離原理利用蘆丁結(jié)構(gòu)在冷乙醇中溶解度小，在熱乙醇中溶解度大，以及在熱水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性質(zhì)分離。蘆丁用溶劑加熱溶解后，趁熱抽濾，濾液放冷后能析出而達(dá)到分離的目的（如不純可再重復(fù)操作進(jìn)行分離）。也可采用醇溶水沉法進(jìn)行精制。3.蘆丁的鑒定原理蘆丁的鑒定原理（1）利用吸附薄層色譜的分離原理，蘆丁與蘆丁對照品在同一條件下進(jìn)行展開

3、，顯色，以達(dá)到鑒定蘆丁的目的。（2）通過專屬的化學(xué)顯色反應(yīng)（如三氯化鋁顯色反應(yīng)），確定蘆丁的成分類型（黃酮類）。(三)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.用堿提法、水提法、醇提法提取槐米中蘆丁。2.用酸沉法和冷卻過飽和法分離蘆丁。3.溶劑重結(jié)晶精制蘆丁。4.薄層色譜法和顯色反應(yīng)鑒定蘆丁(四)實(shí)驗(yàn)藥材儀器與試劑實(shí)驗(yàn)藥材儀器與試劑1.實(shí)驗(yàn)藥材槐米20g。2.儀器：磁力加熱攪拌器、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、粉碎機(jī)、500ml燒杯，1000ml燒杯，50ml燒杯，250ml

4、園底燒瓶、500ml園底燒瓶、100ml量筒、50ml量筒、100ml錐形瓶、50ml錐形瓶、研缽、移液管、減壓過濾裝置，布氏漏斗，抽濾瓶、層析缸等。3.試劑：硼砂、氧化鈣、HCI、三氯化鋁、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、甲酸、濾紙、PH試紙等。（五）實(shí)驗(yàn)步驟1.提取（水提取法）稱取槐米粗粉20g，在研缽中研碎后放入500ml燒瓶中，加水200ml，用磁力加熱攪拌器加熱煮沸30min，趁熱過濾。殘?jiān)ú僮饕淮?，合并兩次濾液，放置冰箱中析晶，

5、待全部析出后，減壓抽濾，用少量蒸餾水洗滌蘆丁結(jié)晶，抽干，得粗制蘆丁，干燥，稱重，計(jì)算得率。2.精制（醇水重結(jié)晶法）取粗制蘆丁1g，置于250ml園底燒瓶中，加80%乙醇30ml加熱回流15分鐘，趁熱抽濾。濾液置250ml燒杯中，向?yàn)V液中加蒸餾水（約3~4倍量）至溶液呈明顯混濁，室溫放置，抽濾得精致蘆丁。用3（1）點(diǎn)滴顯色反應(yīng)從放置一周的粗提物中取蘆丁的甲醇溶液（供試液）分別點(diǎn)在濾紙上，揮去溶劑，紫外照射，光吸收明顯（115），然后分別添

6、加供試液蘆丁的甲醇溶液和顯色劑2%三氯化鋁乙醇溶液，顯黃色（116），在紫外燈下λ365nm觀察有明顯亮斑（117）。（2）薄層色譜鑒定吸附劑：硅膠GF254薄層板（5.0cmX10.0cm）。樣品：自制蘆丁（用甲醇溶解，濃度約1mgml）對照品：蘆丁對照品的甲醇溶液。展開劑：三氯甲烷甲醇甲酸（7∶3∶0.5）顯色：a.先在可見光下觀察，然后在紫外光下觀察，有明顯紫外吸收。（365nm紫外燈下觀察）b.遮擋硅膠板左側(cè)噴三氯化鋁試劑（11

7、8），365nm紫外燈下觀察，右側(cè)有顯色劑呈黃色，左側(cè)有明顯紫外吸收（119）。4.注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)(1)硼砂因能與蘆丁中的鄰二酚羥基結(jié)合，起保護(hù)鄰二酚羥基，不被氧化破壞的作用。實(shí)驗(yàn)證明，提取時(shí)加入硼砂，產(chǎn)品的質(zhì)量會好些。(2)石灰乳既能達(dá)到堿溶解提取蘆丁的目的，還可以除去槐米中大量的粘液質(zhì)和酸性樹脂（形成鈣鹽沉淀），但PH不能過高和長時(shí)間煮沸，因?yàn)闀?dǎo)致蘆丁的水解而開環(huán)和形成鈣鰲合物，影響產(chǎn)品的質(zhì)量和產(chǎn)率。(3)PH過低（酸性太強(qiáng)）會

8、使蘆丁形成洋鹽而收率降低。(4)稱量蘆丁時(shí)，先將帶濾紙的漏斗稱重，再將盛樣品的帶濾紙的漏斗稱重，差重即為樣品的重量。（七）結(jié)果計(jì)算及分析（七）結(jié)果計(jì)算及分析產(chǎn)率產(chǎn)率小漏斗濾紙重29.69g抽濾后小漏斗濾紙樣品重30.20g樣品凈重0.51g產(chǎn)率=（0.511.008）100%=50.60%比移值比移值Rf=35.75=0.522分析：1、水提法不能充分溶解蘆?。?、精制時(shí)粗提物聚集成固體顆粒，沒有充分溶解；3、抽濾、轉(zhuǎn)移等過程的損失。（