pfcp2.9重組惡性瘧疾疫苗ⅰ期臨床試驗(yàn)免疫應(yīng)答及特性分析

1、Y 8 9 7 3 8 8分類號(hào)一?—一第二掌論文編號(hào)——一 密級(jí)——軍醫(yī)天罾 住論文P 崛P ．2 ．9 重組惡性瘧疾疫苗I 期臨床試驗(yàn)免疫應(yīng)答及特性分析S p e c i 6 c i t ya n d c h a r a c t e r i z a t i o n o f i m m u n e r e s p o n s e t o P 脅s m D 講H m』4 f c 枷，w m C h i m e r i c P m t e

2、 i n2 ．9 ( P f C P - 2 ．9 ) i n P h a s e It r i a l ．研究生姓名 ?一篚 旦 握指導(dǎo)教師姓名渣里醫(yī)熬援 簋三星匡太堂痘愿生塑堂教硒窒——一一一——土漁直翅殷蹬8 Q Q 曼2 Q Q 箜3申請(qǐng)學(xué)位類別——亟一土一～專業(yè)名稱 痘廈生物堂．．論文提交日期 2 Q Q §生§且 論文答辯日期一2 Q Q §生§旦學(xué)位授予單位和日期——一一筮三至醫(yī)太堂

3、 一一2 Q Q §生§目二0 0 六年五月第一二軍睦大學(xué)碩’卜學(xué)位論文摘 要瘧疾是世界范圍內(nèi)危害最嚴(yán)重的一種蚊媒寄生蟲病，尤其是對(duì)非洲、南美以及東南亞地區(qū)產(chǎn)生極大危害。目前，全球每年瘧疾臨床發(fā)病人數(shù)在3 。5 億，1 0 0 - 3 0 0萬(wàn)人死于該病，其中9 0 ％的死亡數(shù)發(fā)生在非洲，絕大部分是5 歲以下的兒童。惡性瘧原蟲( 脅硎D 幽Ⅷ丘比f(wàn) p 口，“m ，彤) 是引起撒哈拉以南非洲地區(qū)瘧疾感染的主要病原體，

4、能夠引起重癥瘧疾甚至死亡。近年來(lái)，由于瘧原蟲抗藥性蟲株及抗殺蟲劑蚊媒的產(chǎn)生和蔓延，使得疫區(qū)防治形勢(shì)極為嚴(yán)峻，迫切需要研制新型有效的方法用于瘧疾防治。因此，研制安全、有效，尤其是能夠用于兒童瘧疾預(yù)防的疫苗已經(jīng)迫在眉睫。通過(guò)全球科研人員近3 0 年的共同努力，目前已經(jīng)有多個(gè)疫苗候選抗原進(jìn)入臨床實(shí)驗(yàn)，其中包括本教研室主研的重組瘧疾紅內(nèi)期疫苗P f c P ．2 ．9 。該疫苗由惡性瘧原蟲裂殖子表面蛋白( M e m z o i t e S u

5、 r f a c e P r o t e i n1 ，M s P l ) 和裂殖子頂端膜抗原( A p i c a l M e m b r a n e A n t i g e n1 ，A M A l ) 的c ．末端區(qū)域通過(guò)接點(diǎn)序列P 2 8 融合而成，并在畢氏酵母中得到高水平分泌表達(dá)。以M o n t a Ⅱi d eI s A 7 2 0 為佐劑，能夠誘導(dǎo)家兔及猴子產(chǎn)生高水平的抗體滴度，1 5 ％的P f C P ．2 ．9 免疫血

6、清能有效抑制瘧原蟲生長(zhǎng)。本研究對(duì)P f C P ．2 ．9 疫苗免疫志愿者體內(nèi)的抗體特異性進(jìn)行分析，并利用P f C P ．2 ．9 的單克隆抗體對(duì)志愿者血清中產(chǎn)生抗體類型進(jìn)行分析。P f C P 一2 ．9 重組疫苗由M S P lc 末端1 9 k D a 片段( M S P l —1 9 ) 及A M A 一1 的第1 I I 亞區(qū)( A M A l 一I I I ) 通過(guò)接點(diǎn)序列P 2 8 融合而成，其中M s P l ．1 9

7、 包含兩個(gè)表皮生l 圭因子樣結(jié)構(gòu)域( E p i d e r m a l G r o w c h F k t o r ．1 i k e d o m a i n ，E G F ．1 i k ed o m a i n ) ，分別定名為E G F l 和E G F 2 ) 。為了探討P f C P ．2 ．9 疫苗免疫志愿者產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)的特異性，除本實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建的M s P l ．1 9 和A M A l 一I I I 兩個(gè)重組蛋白以及P

8、 2 8合成肽外，本研究構(gòu)建和表達(dá)了M s P l ．1 9 的兩個(gè)E G F 樣結(jié)構(gòu)域即E G F l 和E G F 2 。以含有P f c P - 2 ．9 片段的質(zhì)粒為模板，P c R 擴(kuò)增相應(yīng)的E G F l 和E G F 2 兩個(gè)片段，將其克隆至表達(dá)載體p P I c 9 K 上，轉(zhuǎn)化畢氏酵母G s l l 5 株，并利用G 4 1 8 篩選高表達(dá)的克隆，經(jīng)甲醇誘導(dǎo)分泌表達(dá)。用P f C P 一2 ．9 免疫小鼠獲得的抗血清對(duì)