脂蛋白代謝中活性蛋白的結構與功能1.載脂蛋白avapoav的功能;2.載脂蛋白avapoav基因多態(tài)性與冠心病

1、脂蛋白代謝中活性蛋白的結構與功能1 ． 載脂蛋白A V ( a p o A v ) 的功能2 ． 載脂蛋白A v ( a p o A V ) 基因多態(tài)性與冠心病研究生：畢楠導 師：陳保生學科專業(yè)：生物化學與分子生物學研究方向：脂蛋白與載脂蛋白的結構與功能研究入學時間：二零零二年九月所在院所：中國協(xié)和醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院中國醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所二零零五年七月中國協(xié)和醫(yī)科大學博士生畢業(yè)論文 3胞內T G 水平和總膽固醇水平無明顯變化，但r

2、 e a 卜t i m e R T —P c R 法檢測到肝臟內T G 合成的關鍵酶一一二酯酰甘油乙酰轉移酶1 ( d i a c y l g l y c e r o la c y l t r a n s —f e r a s e 1 ，D G A T l ) 和肝脂酶( h e p a t i cl i p a s e ，H L ) 的表達被顯著抑制。進一步，我們采用腺病毒介導的基因轉移的方法，研究了a p o A v 對H T G

3、模型動物脂質代謝的影響。將L P L 基因敲除小鼠和A p o E 基因敲除小鼠進行分組( L P L一／一小鼠每組n = 3 ，A p o E 一／一小鼠每組n = 6 ) 。實驗組尾靜脈注射2 ×1 0 9i f u 的A d 一} l A p o A v ，對照組注射等劑量的A d ．h A P 。感染后第7 天，從m R N A 水平和蛋白水平在A d —1 1 A p o A V 組動物的肝臟中均檢測到了人A p o

4、 A v 的表達。酶法測定贏漿T G 和總膽固醇水平發(fā)現(xiàn)，人A p o A V 轉基因可以使L P L 一／_ 小鼠的T G 水平下降7 8 ％( P = O ．0 2 ) 、總膽固醇水平下降6 6 ％( P = O ．0 3 ) ； P E G 法分離H D L 后測定皿L —C水平無明顯改變( P = O ．3 5 ) 。用放射性同位素標記法測定L P L 和H L 的活性，進一步證實L P L 一／一小鼠體內存在L P L 功能的

5、缺陷，活性幾乎為O ；而且A d _ h A p o A V組L P L 活性和H L 活性與對照組相比并無明顯差異。腺病毒介導的h A p o A v 轉基因可以同樣的顯著改變A p o E 一／一小鼠的血漿脂質譜：A d —A p o A V 組血漿T G 水平下降了7 2 ％( P = O ．0 0 1 ) ，總膽固醇水平下降了5 7 ％( P < 0 ．0 0 1 ) ， H D L - C 水平無明顯改變( P = 0

6、．6 2 ) 。h A p o A V 的表達不影響A p o E 一／一小鼠血漿L P L 和H L 的活性。我們還使用r e a l —t i m eR T —P C R 的方法分析了a p o A v 的組織表達譜，在1 1 種組織( 腦、脂肪、膽囊、心臟、小腸、腎、肝臟、骨骼肌、肺、脾臟和睪丸) 中，發(fā)現(xiàn)A p o A V 除了在肝臟中高表達以外，在膽囊中也有特異表達。在肝臟中的表達量約是B —a c t i n 的1 ．3 8

7、 倍，在膽囊中約是B —a c 血表達的l ，2 0 。本研究利用表達人A p 0 A V 的復制缺陷的重組腺病毒作為轉基因工具，發(fā)現(xiàn)A p o A V 高表達對H e p G 2 細胞內的脂質水平無明顯影響，但可在m R N A 水平顯著抑制D G A T l 和H L 的表達。腺病毒介導的人A p o A v 轉基因在小鼠體內L P L 功能缺失的情況下仍可顯著降低T G 和總膽固醇水平，說明a p o A v 對脂質代謝的影響獨立