低溫菌pseudomonassp.hd8產(chǎn)絮凝劑的提取及純化

1、●e0 0 7 0 8 8中文摘要中文摘要微生物絮凝劑是由微生物代謝產(chǎn)生的新型、高效、廉價的水處理藥劑，與傳統(tǒng)的高分子絮凝劑相比，具有無毒、易于降解、無污染以及易于實現(xiàn)工業(yè)化等優(yōu)點。在給水處理、發(fā)酵行業(yè)以及生物制藥領域可推廣應用，具有良好的發(fā)展前景。本研究所在實驗室已經(jīng)從處理低溫污水的生物反應器中篩選得到一株低溫產(chǎn)絮菌假單胞桿菌P s e u d o m o n a s s p ．H D 8 ，本研究首先對該菌所產(chǎn)絮凝劑進行初步提取和成

2、分分析。采用乙醇沉淀法進行提取，得到絮凝劑的產(chǎn)量為0 ．5 5 6 9 9 ／L ，對高嶺土懸浮液的絮凝率可達9 3 ．6 ％，最佳投加量為0 ．0 0 5 9 ／L 。通過定性定量分析可知絮凝劑的主要成分為多糖和蛋白質，其中含糖5 1 ％、蛋白質4 ．1 2 ％，氨基糖0 ．3 1 ％，葡萄糖醛酸2 ．4 7 ％。為提高絮凝劑的提取產(chǎn)量，對絮凝劑提取工藝中的影響因素進行考察，包括發(fā)酵液的離心轉數(shù)、離心時間、沉淀劑種類、沉淀劑用量、上清

3、液濃縮倍數(shù)與超聲處理條件。并根據(jù)考察結果采用均勻設計法對菌株H D 8 產(chǎn)絮凝劑的提取工藝進行了優(yōu)化。得到的最佳提取工藝為：菌株發(fā)酵培養(yǎng)2 2 h 后，超聲波4 0 H Z 處理3 0 m i n ，4 5 0 0 r ／r a i n 離心8 m i n ，加入2 倍預冷無水乙醇，置于4 “ C 靜置提取2 4 h ，6 0 0 0 r ／m i n離心1 5 m i n ，用9 5 ％的乙醇洗滌沉淀，6 0 0 0 r ／m i n

4、 離，t b1 0 m i n ，收集沉淀，干燥，制得絮凝劑粗制品。工藝優(yōu)化后提取得到絮凝劑的產(chǎn)量為0 ．6 9 1 8 9 ／L ，產(chǎn)量提高了2 4 ．2 ％。采用s e v a g e 法去除絮凝劑中的蛋白質，分析絮凝劑中的有效成分為多糖。將絮凝劑粗制品通過離子交換層析和凝膠過濾層析進行純化，得到3 個絮凝活性峰，以H 8 ．3 的絮凝活性最高，絮凝率達到9 5 ．9 ％。進一步對分離得到的絮凝活性成分進行結構鑒定。薄層層析分析表明