廣東樂昌酸化尾礦微生物多樣性研究.pdf

1、尾礦酸化能引起污染，導致一系列的環(huán)境問題。而尾礦的酸化主要是由存在于尾礦中的嗜酸鐵氧化、硫氧化微生物引起的。目前對極端酸性環(huán)境中微生物的多樣性的了解仍然十分有限。為了更好的了解尾礦嗜酸微生物的多樣性，本研究結合微生物純培養(yǎng)方法和分子生物學實驗方法，調(diào)查了廣東樂昌酸化尾礦微生物多樣性。主要研究結果如下: 1、樣品理化分析結果表明，廣東樂昌鉛鋅尾礦pH值為1.94，屬于極端酸性環(huán)境。硫酸根離子含量為67.33g/Kg。極低pH導致

2、大量重金屬溶出，F(xiàn)e含量高達87496mg/kg, Pb、Zn含量分別為3109, 1548 mg/kg。 2、統(tǒng)計雙層培養(yǎng)基(overlay plates)上出現(xiàn)的每克干重樣品的菌落形成單位(clone forming units, CFU), Feo, FeSo, YEo平板上的CFU/干重分別為:(2.2±0.3)×103，(2.2±0.2)×103，(1.6±0.1)×104。用雙層培養(yǎng)基共得到7個與尾礦酸化相關的菌株

3、。經(jīng)過菌株16SrRNA基因鑒定，確認其中有3個屬于Leptospirillumferriphilum，2個屬于Acidithiobacillusferrooxidans，1個屬于Sulfobacillusmontserratensis，1個屬于Acidiphiliumcryptum。 3、提取尾礦樣品中的總DNA，經(jīng)擴增后構建克隆文庫。隨機挑取文庫中143個克隆子，進行限制性片段長度多態(tài)性分析(restrictionfrag

4、mentlengthpolymorphism，RFLP)，共獲得了15個不同的RFLP型。對每一RFLP型內(nèi)的代表進行序列測定和系統(tǒng)發(fā)育分析，得到8個測序型。經(jīng)過在線程序CHECK-CHIMERA分析，發(fā)現(xiàn)一個測序型為嵌合體，排除于隨后的分析中。這個嵌合體所在的RFLP型只有一個克隆子代表。在有效的142個克隆子中，代表Thermoplasmales目古細菌的克隆子共有135個，其中132個克隆子(2個序列型，代表分別為clone9，4

5、4)在系統(tǒng)發(fā)育上歸為Ferroplasma屬；2個克隆子(2個序列型，代表分別為clone43，69)在系統(tǒng)發(fā)育上歸為Dplasma屬；1個克隆子(1個序列型，代表為clone28)在系統(tǒng)發(fā)育上歸為Cplasma屬。同時發(fā)現(xiàn)少數(shù)細菌存在于該環(huán)境中，6個克隆子(1個序列型，代表為clone61)在系統(tǒng)發(fā)育上歸為Nitrospira綱，1個克隆子(1個序列型，代表為clone22)在系統(tǒng)發(fā)育上歸為Proteobacteria綱。