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1、兩棲動(dòng)物幼體在發(fā)育過程中對(duì)環(huán)境變化和化學(xué)污染物均較敏感。為研究Cr3+和Cr6+對(duì)兩棲動(dòng)物幼體的急性毒性效應(yīng),將中國(guó)林蛙(Rana.chensinensis)26~28期蝌蚪暴露在含不同濃度Cr3+和Cr6+的自來水中,統(tǒng)計(jì)不同濃度Cr3+和Cr6+對(duì)林蛙蝌蚪24、48、72和96h的死亡率,計(jì)算半數(shù)致死濃度(LC50)和安全濃度(SC),分析比較Cr3+和Cr6+對(duì)林蛙蝌蚪的急性毒性效應(yīng)的差異。然后,為研究Cr3+和Cr6+對(duì)林蛙幼體
2、生長(zhǎng)發(fā)育的影響,將林蛙蝌蚪暴露于亞致死濃度的Cr3+和Cr6+水中飼養(yǎng),直至完全變態(tài),測(cè)量不同發(fā)育時(shí)期的蝌蚪體重和全長(zhǎng),統(tǒng)計(jì)蝌蚪完全圈變態(tài)所需的時(shí)間和畸形率。另外,用組織學(xué)方法觀察林蛙蝌蚪在Cr3+和Cr6+的染毒過程中肝、腎的組織損傷,用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)各處理組林蛙肝中金屬硫蛋白(MT)的表達(dá),用酶組織化學(xué)方法檢測(cè)林蛙腎中堿性磷酸酶(ALP)和酸性磷酸(ACP)的活性,探討Cr3+和Cr6+的毒性效應(yīng)機(jī)制。本研究的主要結(jié)果如下:1
3、.急性毒性實(shí)驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,染毒24~72hCr3+對(duì)蝌蚪的LC50為34.09±1.06~32.58±0.11mgCr3+/L,Cr6+對(duì)蝌蚪的LC50為91.97±5.32~35.79±1.40mgCr6+/L,可見在72h內(nèi)Cr3+表現(xiàn)出較強(qiáng)的毒性;但染毒96h,Cr3+對(duì)蝌蚪的LC50為32.05±0.20mgCr3+/L,較Cr6+的28.81±1.87mgCr6+/L高,說明較長(zhǎng)時(shí)間的染毒,Cr6+對(duì)蝌蚪的毒性較Cr3+強(qiáng)
4、。另外,Cr3+對(duì)蝌蚪的LC0~LC100范圍小于Cr6+,表明蝌蚪對(duì)于Cr3+敏感性比Cr6+強(qiáng)。 2.分別在林蛙蝌蚪Cr3+和Cr6+染毒21d和35d,測(cè)量蝌蚪的體重和全長(zhǎng)。結(jié)果顯示,在染毒21d,Cr3+和Cr6+的各處理組,蝌蚪的生長(zhǎng)較對(duì)照組緩慢,說明Cr3+和Cr6+對(duì)蝌蚪的生長(zhǎng)產(chǎn)生了抑制,尤其是在0.75、1.00mgCr6+/L組,對(duì)蝌蚪生長(zhǎng)的抑制性較強(qiáng),與對(duì)照組成極顯著差異。染毒35d,在Cr3+和Cr6+低
5、濃度組,鉻對(duì)蝌蚪生長(zhǎng)的抑制效應(yīng)減弱。說明隨著蝌蚪的生長(zhǎng),其對(duì)鉻的抵抗力逐漸增強(qiáng)。而且低濃度的Cr3+和Cr6+隨著蝌蚪個(gè)體的增長(zhǎng)逐漸接近于蝌蚪所需鉻的有益劑量。亞致死濃度的Cr3+和Cr6+對(duì)林蛙蝌蚪完全變態(tài)時(shí)間影響不大,對(duì)蝌蚪的致畸毒性較低。 3.染毒林蛙幼體肝的組織切片觀察顯示,Cr3+和Cr6+皆能對(duì)林蛙幼體肝組織產(chǎn)生毒性效應(yīng),且二者對(duì)肝組織細(xì)胞的損傷相似,都可使細(xì)胞膜破損,胞質(zhì)疏松,肝細(xì)胞脂肪性變。MT是重要的重金屬解
6、毒蛋白,免疫組織化學(xué)檢測(cè)顯示,Cr3+和Cr6+均能誘導(dǎo)肝細(xì)胞的MT表達(dá)增高。在Cr3+各處理組,MT的表達(dá)隨Cr3+濃度的升高而增加,以螯合較多的Cr3+,解除毒性。在較低濃度的Cr6+中,MT的表達(dá)與濃度呈正相關(guān);在1.00mgCr6+/L組,MT的表達(dá)又呈下降趨勢(shì),可能是高濃度的Cr6+產(chǎn)生了較強(qiáng)的細(xì)胞毒性,對(duì)MT的表達(dá)產(chǎn)生抑制。 4.染毒林蛙幼體腎的組織切片觀察顯示,Cr3+和Cr6+皆可對(duì)腎組織產(chǎn)生毒性損傷,且隨Cr
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