溫室盆栽春蘭可培養(yǎng)內(nèi)生細菌多樣性研究.pdf

1、本研究采用分離培養(yǎng)方法并結合ARDRA和16S rDNA 系統(tǒng)發(fā)育分析對溫室盆栽春蘭可培養(yǎng)內(nèi)生細菌群落多樣性及春蘭根中可分泌IAA 內(nèi)生細菌多樣性進行了初步研究。
　　 通過對消毒劑次氯酸鈉溶液的處理強度進行單因子試驗確定春蘭三種器官表面滅菌的最佳條件。結果顯示：春蘭根和假鱗莖的最佳表面滅菌強度為75％乙醇浸泡3.0 min，3.0％次氯酸鈉溶液浸泡2.0 min，再用75％乙醇浸泡30 s；春蘭葉的最佳表面滅菌強度為75％乙醇

2、浸泡1.0 min，2.0％次氯酸鈉溶液浸泡2.0 min，再用75％乙醇浸泡30 s。
　　 采用R2A、TSA和D?berener 無氮培養(yǎng)基分離純化不同生長狀態(tài)的春蘭根的內(nèi)生細菌。結果顯示：R2A 培養(yǎng)基分離到的內(nèi)生細菌種群數(shù)量最多，為2.5×105 cfu/g fw；TSA培養(yǎng)基分離到的次之，為1.9×105 cfu/g fw；D?berener 無氮培養(yǎng)基分離到的最少，為0.9×105 cfu/g fw。對分離菌株進行

3、ARDRA和16S rDNA 系統(tǒng)發(fā)育分析發(fā)現(xiàn)分離得到的211 株內(nèi)生細菌分屬于α-變形菌綱（50.9％）、γ-變形菌綱（34.6％）、β-變形菌綱（6.7％）、厚壁菌門（5.2％）、放線菌門（1.9％）和擬桿菌門（0.7％）6 大分類單元的23個已知屬，優(yōu)勢菌屬為根瘤菌屬（48.3％）和Dyella（25.8％）。其中R2A 培養(yǎng)基分離到21個屬，TSA 培養(yǎng)基分離到11個屬，D?berener 無氮培養(yǎng)基分離到12個屬，數(shù)據(jù)顯示R2

4、A 培養(yǎng)基為春蘭根內(nèi)生細菌最佳分離培養(yǎng)基。
　　 采用R2A和TSA 培養(yǎng)基對春蘭根、假鱗莖、葉三種器官的內(nèi)生細菌進行分離培養(yǎng)，結果顯示：假鱗莖中分離到的內(nèi)生細菌種群數(shù)量最高，為2.80×103 cfu/g fw；根次之為2.08×103 cfu/g fw；葉最少為0.22×103 cfu/g fw。三種器官共分離到春蘭內(nèi)生細菌123 株，其中分離自根中的57 株分屬于5 大類群的14個屬，優(yōu)勢菌屬為類芽孢桿菌屬（45.79％）

5、；
　　 分離自假鱗莖中的55 株分屬于5 大類群的15個屬，優(yōu)勢菌屬為伯克氏菌屬（42.67％）和鞘氨醇單胞菌屬（21.33％）；分離自葉的11 株分屬于4 大類群的7個屬，無明顯優(yōu)勢菌屬。結果表明春蘭部分內(nèi)生細菌顯示出器官專一性。以上結果說明春蘭內(nèi)生細菌群落具有豐富的多樣性。
　　 采用Salkowski 比色法對分離自春蘭根的256 株內(nèi)生細菌進行分泌IAA的功能篩選，其中57 株具有分泌IAA 能力，占篩選菌株總

6、數(shù)的22.3％。對該57 株內(nèi)生細菌進行ARDRA和16S rDNA 系統(tǒng)發(fā)育分析，結果顯示：其分屬于6 大類群的18個已知屬和4個潛在新種或新屬，其中類芽孢桿菌屬既是可分泌IAA的內(nèi)生細菌中的最優(yōu)勢菌屬（29.8％），又是高產(chǎn)IAA的主體類群。
　　 據(jù)目前所知，Altererythrobacter、Brachybacterium、Chitinophaga、Cellulosimicrobium、Dyella、Labrys、Pa