松葉蜂病原真菌的分離鑒定及致病性研究.pdf

1、松葉蜂類昆蟲屬于昆蟲綱(Insecta)、膜翅目(Hymenoptera)、松葉蜂科(Diprionidae)，是我國重要的森林害蟲，它們以幼蟲取食多種松樹和云杉的針葉造成危害。目前對松葉蜂的暴發(fā)主要采用飛機噴灑化學殺蟲劑和施放化學殺蟲煙霧劑進行防治，化學防治雖然可以在短時間內降低蟲口密度，但是大規(guī)模的化學防治，污染環(huán)境，殺傷天敵，破壞森林生態(tài)系統(tǒng)，使松葉蜂產生抗性，不能徹底解決害蟲的危害問題。應用病原真菌進行防治是實現(xiàn)松葉蜂幼蟲可持續(xù)

2、控制的有效方法。本文在東北吉林省伊通縣、山西省陽泉、盂縣、中條山森林經(jīng)營局的泗交等不同種類的松葉蜂發(fā)生的林地，采集自然的感病蟲尸，從中分離和篩選出具有高致病力的病原真菌菌株,用于生物殺蟲制劑的生產，對松葉蜂的成功防治具有重要意義。內容包括:(1)病原真菌的采集、分離;菌種的顯微形態(tài)和超微結構觀察;菌種的DNA提取，PCR產物序列分析，以及分子鑒定。(2)不同溫度條件和紫外線照射對菌株的菌落直徑和產孢量的影響;菌株胞外蛋白酶、脂肪酶和幾丁

3、質酶的活性與各菌株對松葉蜂幼蟲的侵染力之間的關系。(3)不同菌株侵染后松葉蜂幼蟲體內主要保護酶和解毒酶的活性變化。(4)室內試驗和林間試驗比較各菌株的對兩種松葉蜂的致病率效果;致病菌種在蟲體體表侵染情況的掃描電鏡觀察。
　　結果如下:
　　1.從野外采集的自然染菌的松葉蜂蟲尸上分離出了3株菌株，分別命名為FDB01、FYQ01、FXX01，回接殺蟲實驗后發(fā)現(xiàn)這3個菌株均為松葉蜂幼蟲的致病菌株。
　　FDB01菌株是從采

4、自東北吉林省伊通縣紅松林帕克阿扁葉蜂幼蟲Acantholydaparki ShinOhara&Byun上分離獲得，在PDA培養(yǎng)基上，其菌落呈圓形，不透明，白色，粉末狀，菌絲無色，孢子呈圓形或近圓形，分生孢子梗明顯，并能看到膨大的泡囊及瓶頸狀的產孢細胞。
　　FYQ01菌株是從山西省陽泉油松林松阿扁葉蜂幼蟲Acantholyda posticalisMatsumura上分離獲得，菌落呈圓形，不透明，白色，絨毛狀，菌絲無色，孢子呈紡錘

5、形，表面粗糙，成離散的分生孢子鏈。
　　FXX01菌株是從山西夏縣泗交林區(qū)油松林松扁葉蜂幼蟲Acantholyda posticalisposticalis Matsumura上分離獲得，菌落呈圓形，不透明，白色，絨毛狀，菌落背面中央呈深褐色。分生孢子較大，橢圓形，表面是不光滑的，內含油滴。
　　結合菌種的顯微形態(tài)、超微結構和分子鑒定結果，菌株FDB01為白僵菌屬(Beauveria Vuillemin)的球孢白僵菌(Bea

6、uveria bassiana(Bals.) Vuill)，菌株FYQ01為擬青霉屬(Paecilomyces)的粉質擬青霉(Paecilomyces farinosus Brown&Smith)。菌株FXX01為螺旋聚孢霉屬(Clonostachys)的粉紅螺旋聚孢霉(Clonostachys rosea)。
　　2.測定了3菌株在不同溫度條件下和紫外線照射前后的菌落直徑和產孢量變化，以及各菌株的胞外類枯草桿菌蛋白酶、脂肪酶、幾

7、丁質酶的活性，比較了各菌株的致病力。結果顯示，三個菌株都是在25℃時產孢量最高，尤其是菌株FDB01，產孢量在25℃時達到了40.375±0.976×107個/cm2，分別為菌株FYQ01和FXX01的7.34倍和16.15倍;菌株FXX01的菌落生長速度最快，但是產孢量卻最低;抗紫外線能力菌株FDB01在3個菌株中是最強的，說明菌株FDB01的適應力較強。菌株FDB01的3種胞外酶的活性都比較高，說明其對松葉蜂的毒力比較強，致病性比較

8、高。
　　3.測定松葉蜂幼蟲被不同菌株侵染后主要保護酶超氧化物歧化酶SOD、過氧化氫酶CAT、過氧化物酶POD活性變化，發(fā)現(xiàn)松葉蜂幼蟲被白僵菌侵染后，蟲體內SOD，CAT，POD活力均發(fā)生了不同程度的改變，均呈現(xiàn)為先升高后降低的趨勢，但是達到峰值的時間在各菌株之間是不同的，說明各菌株的毒力和作用速度是不同的。
　　測定松葉蜂幼蟲體內主要解毒酶系乙酰膽堿酯酶(AchE)和谷胱甘肽-S-轉移酶(GST)的活性，結果顯示3菌株對A

9、chE和GST的影響情況相似，都有先刺激后抑制的作用。
　　4.室內和林間試驗結果發(fā)現(xiàn)，室內試驗松葉蜂幼蟲的死亡率均高于室外，而且3菌株對夏縣松扁葉蜂的致死率高于陽泉的松阿扁葉蜂，在3菌株中FDB01的致病效果是最好的，尤其是對夏縣松葉蜂，室內和林間試驗的校正死亡率分別達到了分別達到93.3％和90％。
　　掃描電鏡觀察病原真菌在松葉蜂幼蟲表面的侵染情況發(fā)現(xiàn)，昆蟲頭部、臀部、前胸，各體節(jié)的節(jié)間褶部位是真菌容易附著和入侵的部位