三種人參屬藥用植物熒光原位雜交技術及核型分析.pdf

1、人參(Panax ginseng C.A.Mey)、西洋參(P.quinquefolius L.)、三七(P.notoginseng(Burk.)F.H.chen)三種是人參屬代表性藥用植物，具有較高的藥用價值和經(jīng)濟價值，受到研究學者的高度重視。然而，目前有關三者的研究工作多集中在栽培、生理、藥理藥化等方面，而對其遺傳特性方面的研究相對較少，從而制約了一些分子生物技術在人參屬藥用植物中的應用。本文以三種人參屬藥用植物不同分生組織為試材，

2、優(yōu)化了各物種材料的染色體制片技術，以PCR法篩選到的rDNA序列為探針，對三種人參屬藥用植物進行雙色熒光原位雜交，并分析其核型和親緣關系。主要研究結果如下:
　　1.通過對人參屬藥用植物不同材料染色體制片的影響因素進行對比研究，優(yōu)化了不同材料染色體制片技術。結果表明:染色體制片取材是關鍵，組培苗根尖長至2cm，種子根尖長至1.5cm，參苗根尖長至1cm，愈傷組織繼代后6-9d時，取材適宜。三種根尖經(jīng)0℃冰水預處理10-15h或2m

3、mol/L8-羥基喹啉預處理2-6h，染色體形態(tài)清晰，愈傷組織0℃放置24h，染色體聚縮程度適中。37℃水浴條件下，組培苗根尖和參苗根尖經(jīng)2％纖維素酶+1％果膠酶酶解90min，種子根尖和愈傷組織酶解120min酶解程度高，染色體分散且背景干凈。染色方法采用卡寶品紅染液和45％醋酸較好。本試驗條件下，種子根尖適合采用滴片法制片，其他材料適合采用壓片法。
　　2.本文采用PCR法篩選人參屬藥用植物rDNA探針，對人參、西洋參、三七進

4、行熒光原位雜交，完善了人參屬藥用植物熒光原位雜交技術。結果表明:篩選到的8種rDNA探針，其中高度保守的p18S、p45S1、p45S2探針在三個物種染色體上各有一對雜交位點，p5S1探針在人參、西洋參染色體上各有兩對雜交位點，p5S2探針在人參、西洋參染色體上各有一對雜交位點，p5S3、p5S5探針在人參、西洋參染色體上各有兩對雜交位點，在三七染色體上有一對雜交位點，p5S4探針在西洋參染色體上有一對雜交位點。
　　3.本文采用

5、雜交信號好、雜交位點多的探針，對三種人參屬藥用植物進行雙色熒光原位雜交，結合染色體特征參數(shù)和rDNA分布位點，分析了人參、西洋參、三七核型及物種間親緣關系。結果表明:人參染色體核型公式為2n=48=30m+14sm+2st+2T，p18S探針在人參第1對染色體隨體上有一對清晰的雜交位點，p5S1探針有兩對雜交信號，一對信號較強，位于第14對染色體短臂靠近著絲粒位置，一對信號較弱，位于第3對染色體長臂緊挨著絲粒位置;西洋參染色體核型公式為

6、2n=48=22m+22sm+2st+2T，p18S探針在西洋參第五對染色體短臂上有一對清晰的雜交位點，p5S3探針有兩對雜交信號，一對信號較強，位于第9對染色體短臂靠近著絲粒位置，一對信號較弱，位于第6對染色體長臂緊挨著絲粒位置;三七染色體核型公式為2n=24=20m+4sm，p18S探針在三七第1對染色體短臂中間位置有一對信號較強雜交位點，p5S3探針在第11對染色體短臂中間位置有一對信號較弱雜交位點。核型似近系數(shù)聚類分析及rDNA