適配體納米金比色法靈敏度影響因素研究及其在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用.pdf

1、適配體可以吸附在納米金上，當(dāng)靶標(biāo)存在時(shí)，則從納米金上解離與靶標(biāo)結(jié)合從而在鹽的作用下控制納米金的顏色變化;而當(dāng)適配體上標(biāo)記著熒光素時(shí)，與納米金結(jié)合后導(dǎo)致熒光淬滅，再加入靶標(biāo)，適配體離開(kāi)納米金與靶標(biāo)結(jié)合，熒光得以恢復(fù)，從而分別提供了簡(jiǎn)單、快速、可以肉眼觀察的比色分析技術(shù)和靈敏、高效的熒光分析技術(shù)。本研究通過(guò)對(duì)納米金溶液優(yōu)化從而提高抗生素藥物磺胺二甲基嘧啶的比色/熒光法檢測(cè)靈敏度;對(duì)適配體優(yōu)化從而提高環(huán)境污染物17β-雌二醇的比色法檢測(cè)靈敏度

2、;自行設(shè)計(jì)polyT10從而建立農(nóng)藥滅蠅胺的高靈敏比色檢測(cè)方法。主要內(nèi)容包括以下三部分:
　　1、研究了納米金溶液中殘留的非納米金成分對(duì)基于適配體納米金比色法和熒光法靈敏度的影響。納米金在制備過(guò)程中會(huì)殘留一些非納米金成分在其溶液中，其中的檸檬酸鈉和三種酸（鹽酸、檸檬酸、酮戊二酸）在適配體納米金比色法和熒光法中起著抑制的作用。通過(guò)將納米金溶液離心去上清液后用水重新溶解，結(jié)果發(fā)現(xiàn):首先，檸檬酸鈉能增強(qiáng)標(biāo)記在適配體上的FAM熒光值，從而

3、降低了納米金的熒光淬滅效率;其次，三種酸能淬滅FAM的熒光，從而降低了加入靶標(biāo)后的熒光恢復(fù)率;最后，三種酸降低了納米金溶液的pH，使納米金表面吸附的適配體增加，需要有更多的靶標(biāo)與適配體反應(yīng)，從而降低了比色法的靈敏度。以磺胺二甲基嘧啶(SDM)為例，發(fā)現(xiàn)與原納米金相比，用水復(fù)溶納米金可以將其比色/熒光法的靈敏度都提高10倍。
　　2、研究了適配體鏈長(zhǎng)度對(duì)基于適配體納米金比色法靈敏度的影響。將17β-雌二醇的76mer適配體截取成P1

4、和P2兩個(gè)片段，結(jié)果發(fā)現(xiàn)P1+P2仍保持著原76mer適配體與靶標(biāo)結(jié)合的能力及特異性，而且由于短的ssDNA片段更容易吸附在納米金上，需要的濃度比長(zhǎng)鏈的低，另外長(zhǎng)的ssDNA在納米金上比短的ssDNA吸附得更緊，即結(jié)合力強(qiáng)，需要更多的靶標(biāo)才能與其反應(yīng)從而引起納米金溶液顏色變化，所以最后片段化的適配體使檢測(cè)靈敏度提高了10倍，即可以檢測(cè)到0.1ng/mL的17β-雌二醇。
　　3、建立了基于納米金和polyT10的滅蠅胺(CYR)比

5、色檢測(cè)方法。單鏈polyT10可以吸附在納米金上保護(hù)其在鹽存在時(shí)不變色，而當(dāng)加入靶標(biāo)火蠅胺時(shí)，polyT10與其通過(guò)氨鍵結(jié)合導(dǎo)致從納米金上解離，失去了保護(hù)的納米金在鹽存在時(shí)變藍(lán)，從而建立了一種高靈敏度的滅蠅胺比色檢測(cè)方法，并對(duì)鹽濃度和polyT10濃度進(jìn)行了優(yōu)化。在優(yōu)化好的條件下，用紫外分光光度計(jì)測(cè)定AuNPs的光譜變化及裸眼觀察AuNPs的顏色變化，檢測(cè)限(LOD)分別是1和5ng/mL。滅蠅胺在200倍的黃瓜樣品稀釋液中的檢測(cè)限和定