兩親性復(fù)合蛋白用于修飾三種酶的研究.pdf

1、兩親性復(fù)合蛋白由親水性的類膠原蛋白(CLP)與疏水性的類彈性蛋白(ELP)融合而成。其中類彈性蛋白是一種應(yīng)用非常廣泛的結(jié)構(gòu)蛋白，它是一段由人工合成結(jié)構(gòu)類似于天然彈性蛋白的特殊多肽，由五肽(VPGXG)重復(fù)序列構(gòu)成。而類膠原蛋白是一段由三肽(GXY)重復(fù)序列形成的一段具有特殊三螺旋結(jié)構(gòu)的片段。
　　本課題利用基因工程手段將類膠原蛋白與類彈性蛋白形成的兩親性復(fù)合蛋白載體用于修飾三種功能酶。因?yàn)轭惸z原蛋白自身在結(jié)構(gòu)上具有特殊的三螺旋結(jié)構(gòu)

2、，因此這種融合蛋白能夠通過(guò)其中的CLP片段進(jìn)行自組裝形成較好的形態(tài)，而其中的疏水性片段ELP則作為純化標(biāo)簽。本課題分別利用超氧化物歧化酶(SOD)、D-氨基酸氧化酶(DAAO)和過(guò)氧化氫酶(CAT)與兩親性載體CLP-ELP通過(guò)基因工程手段融合得到六種融合蛋白。這些融合蛋白可以利用ELP所特有的可逆相變進(jìn)行純化，這種純化方法簡(jiǎn)單、高效，并能得到目的條帶單一的酶液。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，融合蛋白SOD-CLP-ELP能夠很好的自組裝形

3、成蛋白質(zhì)微孔網(wǎng)絡(luò)(PMN)，而融合蛋白DAAO-CLP-ELP則能夠很好的自組裝形成蛋白質(zhì)納米多孔網(wǎng)絡(luò)(PNN)。微米尺度的蛋白質(zhì)微孔網(wǎng)絡(luò)和納米尺度的蛋白質(zhì)納米多孔網(wǎng)絡(luò)更有利于酶的催化作用。圓二色譜結(jié)果顯示融合后的功能酶大大減少了雙氧水對(duì)其二級(jí)結(jié)構(gòu)的影響。而熒光光譜也顯示，融合酶在尿素條件下的穩(wěn)定性也得到了很好改進(jìn)。除了上述優(yōu)點(diǎn)，在消除超氧自由基的能力上，SOD-CLP1-ELP6和SOD-CLP3-ELP6的酶活都有了一定的提高;DA