以苯丙氨酸為碳端的ACE抑制肽3D-QSAR、活性驗(yàn)證及分子作用機(jī)制研究.pdf

1、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）在血壓調(diào)節(jié)中的關(guān)鍵性作用，使其成為治療高血壓疾病的理想靶點(diǎn)。ACE抑制肽憑借其安全、易吸收等優(yōu)點(diǎn)受到了廣泛關(guān)注。本論文采用以苯丙氨酸為碳端的ACE抑制二、三肽進(jìn)行三維定量構(gòu)效關(guān)系（3D-QSAR）研究并建立相關(guān)模型，根據(jù)所建模型篩選并合成具有良好 ACE抑制活性的三肽并進(jìn)行體外活性驗(yàn)證，同時(shí)采用分子動(dòng)力學(xué)模擬和二維核磁共振實(shí)驗(yàn)相結(jié)合的方法，研究新型ACE抑制肽的分子作用機(jī)制，并給出微觀解釋。本文的主要內(nèi)容由以下

2、四部分組成：
　　第一部分，收集已報(bào)道的53種ACE抑制二、三肽進(jìn)行3D-QSAR CoMFA/CoMSIA以及分子對(duì)接研究，建立了具有良好預(yù)測(cè)能力的CoMFA/CoMSIA模型，并獲得抑制肽分子與ACE受體之間可能的結(jié)合模式。同時(shí)根據(jù)已建立的模型篩選并合成了四種三肽Gly-Glu-Phe（GEF），Val-Glu-Phe（VEF），Val-Arg-Phe（VRF）以及Val-Lys-Phe（VKF）進(jìn)行體外活性實(shí)驗(yàn)，對(duì)模型進(jìn)行進(jìn)

3、一步的驗(yàn)證。
　　第二部分，采用改良的紫外分光光度法對(duì)第一部分中篩選并合成的四種三肽GEF，VEF，VRF以及VKF進(jìn)行體外活性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。其中，GEF的CoMFA/CoMSIA模型預(yù)測(cè)值均與實(shí)驗(yàn)值較為接近，誤差分別為4.49％和7.14%；VEF的CoMSIA模型預(yù)測(cè)值與實(shí)驗(yàn)值的相對(duì)誤差最小，僅為1.08%；VRF的CoMFA模型預(yù)測(cè)值與實(shí)驗(yàn)值之間的相對(duì)誤差最大，為9.87%，但是兩者仍然屬于同一個(gè)數(shù)量級(jí)。上述四種三肽的CoMFA

4、/CoMSIA模型預(yù)測(cè)值均接近與實(shí)驗(yàn)活性值，實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證明了所建模型具有良好的預(yù)測(cè)能力及準(zhǔn)確性。
　　第三部分，采用分子動(dòng)力學(xué)模擬與2D1H-1H-NOESY圖譜相結(jié)合的方法，研究生物活性水溶液GEF-H2O體系和小肽變性條件下的GEF-DMSO體系中GEF分子的構(gòu)象變化以及分子間的弱相互作用。結(jié)果表明GEF分子在水溶液中主要以伸展構(gòu)象存在，折疊構(gòu)象和伸展構(gòu)象之間可以快速相互轉(zhuǎn)換，而在DMSO溶液中主要以折疊構(gòu)象存在，較少存在

5、伸展構(gòu)象。2D1H-1H-NOESY圖譜的得到的結(jié)果與分子動(dòng)力學(xué)模擬結(jié)論一致，理論和實(shí)驗(yàn)的結(jié)果得到很好的吻合。
　　第四部分，本章采用分子動(dòng)力學(xué)研究了GEF分子分別與ACE的C-結(jié)構(gòu)域(C-ACE)、N-結(jié)構(gòu)域(N-ACE)之間相互作用的機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn)GEF分子在C-ACE活性區(qū)域的構(gòu)象較在N-ACE活性區(qū)域的構(gòu)象更舒展，C-ACE的Lys475氨基酸殘基對(duì)配體與受體之間的結(jié)合影響最大，而N-ACE中影響最大的是Lys489氨基酸