威海近海沉積物細(xì)菌富集分離、新菌鑒定及B210捕食現(xiàn)象探究.pdf

1、近海沉積物中微生物多樣性豐富，蘊(yùn)藏大量的潛在新菌資源。本研究通過(guò)細(xì)菌富集分離手段，對(duì)不同富集時(shí)期的近海沉積物樣品進(jìn)行新菌資源挖掘，并通過(guò)454FLX+平臺(tái)宏基因組測(cè)序探究了不同富集時(shí)期富集培養(yǎng)液中細(xì)菌區(qū)系演替規(guī)律。本研究發(fā)現(xiàn)了大量潛在新茵，并對(duì)7株海洋新茵進(jìn)行了多相分類。本研究發(fā)現(xiàn)慢生單胞菌新菌B210具有捕食現(xiàn)象，并對(duì)其進(jìn)行了初步探究。
　　通過(guò)富集分離，獲得326株細(xì)菌，包括49株潛在新菌。通過(guò)宏基因組測(cè)序分析得出:不同富集時(shí)

2、期，富集培養(yǎng)液中有其獨(dú)特的細(xì)菌區(qū)系，為以后有目的性地挖掘海洋新菌提供指導(dǎo);物種豐富度會(huì)隨著富集時(shí)間的增加而降低，而至第30天時(shí)，呈上升趨勢(shì);某些豐富度極低的細(xì)菌門類通過(guò)富集，數(shù)量得到了劇增，如酸桿菌門細(xì)菌。
　　菌株Z1T和JL1分別分離自石花菜和真江蘺，可降解瓊膠。呼吸醌為Q-8。菌株Z1T的主要脂肪酸是C18∶1ω7c、C16∶0和summed feature3(C16∶1ω7c and/or iso-C15∶02-OH)。主

3、要極性脂是磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油和1種未知的氨基脂。DNAG+C含量是45.1 mol％。與最相近物種的16S rDNA序列相似性低于92.3％。根據(jù)多相分類，菌株Zlr和JL1代表Gammaproteobacteria的一個(gè)新屬新種，命名為Marinagarivorans algicola gen.nov.，sp.nov。模式菌株為Z1T(=ATCC BAA-2617T=CICC10859T)。
　　菌株NC2-42T分離自威

4、海近海沉積物，革蘭氏染色可變。呼吸醌是MK-7。細(xì)胞壁含二氨基庚二酸。極性脂組分包括磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺、2種未知的糖脂、1種未知的磷脂、1種未知的氨基磷脂、1種未知的脂質(zhì)。主要脂肪酸是anteiso-C15∶0、iso-C16∶0和C16∶0。基因組DNA G+C含量58.1 mol％。菌株NC2-42T與Paenibacillus profundus有最高16S rDNA序列相似性(92.32％)。通過(guò)多相分類，NC2-42T為

5、Paenibacillaceae的一個(gè)新屬新種，命名為Marinicrinis sediminisgen.nov.，sp.nov。模式菌株為NC2-42T(=KCTC33676T=MCCC1K01238T)。
　　菌株XDB06T分離于威海近海沉積物，革蘭氏染色陰性。呼吸醌是Q-8。主要脂肪酸是iso-C15∶0和C16∶0。極性脂成分為雙磷脂酰甘油、磷脂酰甘油、2種糖脂和4種磷臘?；蚪MDNA G+C含量65.0 mol％。與W

6、enzhouxiangella marina的16S rDNA相似性最高，為96.5％。通過(guò)多相分類，菌株XDB06T是Wenzhouxiangella的一個(gè)新物種，命名為Wenzhouxiangella sediminis sp.nov。模式菌株為XDB06T(=KCTC52041T=MCCC1K02285T)。
　　菌株0W14T分離于文登海洋鹽田，革蘭氏染色陽(yáng)性。MK-7是唯一呼吸醌。肽聚糖類型是A4βL-Om-D-GIu。

7、主要脂肪酸組分是anteiso-C15∶0。極性脂組分是雙磷脂酰甘油、磷脂酰甘油、2種未知的糖脂和4種未知的磷脂?；蚪MDNAG+C含量44.6 mol％。菌株0W14T與Virgibacillus litoralis具有最高16S rDNA相似性(96.0％)。根據(jù)多相分類，菌株0W14T代表Bacillaceae的一個(gè)新屬新種，命名為Marinisalinus sediminis gen.nov.，sp.nov。模式菌株為0W14T

8、(=KCTC33835T=MCCC1H00171T)。
　　菌株NC2-31T分離于威海近海沉積物，革蘭氏染色陽(yáng)性。呼吸醌為MK-7，肽聚糖中含二氨基庚二酸。主要極性脂是雙磷脂酰甘油、磷脂酰甘油和磷脂酰乙醇胺?；蚪MDNA G+C含量46.3 mol％。主要脂肪酸為iso-C15∶0、anteiso-C15∶0、iso-C16∶0和Summed Feature3(C16∶1ω7c and/or iso-C15∶02-OH)?；?

9、6S rDNA序列的系統(tǒng)發(fā)育分析表明菌株NC2-31T在Bacillus內(nèi)形成獨(dú)立分支。根據(jù)多相分類，菌株NC2-31T代表Bacillus的一個(gè)新物種，命名為Bacillus marinisedimentorumsp.nov。模式菌株為NC2-31T(=KCTC33721T=MCCC1K01239T)。
　　菌株WDN1C137T分離于文登海洋鹽田，革蘭氏染色陰性。Q-10是唯一醌型。主要脂肪酸成分為C18∶1ω7c、cyclo

10、 C19∶0ω8c、C16∶0。主要極性脂為磷脂酰甘油、磷酸糖脂、1種未知的糖酯、1種未知的脂質(zhì)、2種未知的氨基脂和3種未知的磷脂?；蚪MDNA G+C含量71.4 mol％。菌株WDN1C137T與Roseivivaxjejudonensis有最高16S rDNA相似性(94.5％)。根據(jù)多相分類，菌株WDN1C137T代表Rhodobacteraceae的一個(gè)新屬新種，Rhodosalinus sediminis gen.nov.，

11、sp.nov。模式菌株為WDN1C137T(=KCTC52478T=MCCC1H00170T)。
　　菌株B210T分離于威海小石島近海沉積物，革蘭氏染色陰性。呼吸醌是MK-7。極性脂組分是雙磷脂酰甘油、磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺、1種未知的磷脂、1種未知的脂質(zhì)。主要脂肪酸是iso-C15∶0?；蚪MDNA G+C含量是64.7 mol％。系菌株B210T與Bradymonas sediminis FA350T有最高16S rDNA

12、序列相似性(89.2％)。通過(guò)多相分類，B210T為Bradymonadales的一個(gè)新屬新種。模式菌株為B210T(=KCTC42951T)。
　　對(duì)鑒定的慢生單胞菌新菌B210捕食現(xiàn)象進(jìn)行了初步探究。其捕食譜廣泛，能捕食革蘭氏染色陽(yáng)性和陰性細(xì)菌，這同黃色黏球菌的捕食譜相似，而不同于只能捕食革蘭氏陰性菌的蛭弧菌;通過(guò)掃描電子顯微鏡觀察、捕食接觸性試驗(yàn)推斷其捕食需要細(xì)胞間接觸。通過(guò)對(duì)菌株B210發(fā)酵液不同組分的抑菌作用的探究，發(fā)現(xiàn)