噬菌蛭弧菌對臨床分離細菌的捕食能力研究.pdf

1、目的：
　　了解臨床分離的五種常見細菌:大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌、金黃色葡萄球菌的耐藥特性，分析噬菌蛭弧菌對五種細菌浮游狀態(tài)及形成的生物膜的捕食能力，為減緩目前微生物耐藥現(xiàn)狀、尋求新的治療對策提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.VITEK(R)2型全自動微生物分析儀、瓊脂稀釋法、MTS法分析2013～2014年間溫州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院臨床分離的五種常見細菌:大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假

2、單胞菌、鮑曼不動桿菌、金黃色葡萄球菌的耐藥特性。
　　2.根據(jù)藥敏結果，將每種臨床分離菌分為兩組:多重耐藥組、非多重耐藥組。采用簡單隨機抽樣的方法從各組中各挑選25株菌（共250株菌）分別與噬菌蛭弧菌ATCC43826共同震蕩培養(yǎng)一段時間，酶標儀檢測各組OD600值，研究噬菌蛭弧菌對臨床分離菌浮游狀態(tài)的捕食能力。每組實驗重復三次。
　　3.通過生物膜形成表型及相關基因型篩選，確定各多重耐藥組中的生物膜形成陽性菌株。分別與噬菌

3、蛭弧菌ATCC43826共同置于96-孔細胞培養(yǎng)板中靜置孵育一段時間，酶標儀檢測各組生物膜形成情況，研究噬菌蛭弧菌阻止菌株形成生物膜的能力。每組實驗重復三次。
　　4.各生物膜形成陽性菌株置于96-孔細胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)并形成生物膜后，分別與噬菌蛭弧菌ATCC43826共同孵育，酶標儀檢測各組生物膜被清除的程度，研究噬菌蛭弧菌消除菌株預形成的生物膜的能力，每組實驗重復三次。
　　5.掃描電鏡觀察各標準菌株預形成的生物膜被噬菌蛭弧

4、菌捕食后的形態(tài)。
　　結果：
　　1.藥敏分析結果表明:大腸埃希菌對阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、厄他培南、亞胺培南、頭孢替坦仍保持較高的敏感率;肺炎克雷伯菌對阿米卡星、厄他培南、亞胺培南、頭孢替坦保持較高的敏感率;銅綠假單胞菌對妥布霉素、阿米卡星敏感率較高;鮑曼不動桿菌對所測定的各類抗菌藥物的耐藥率均在50％以上;金黃色葡萄球菌對替考拉寧、萬古霉素、替加環(huán)素、利奈唑胺、鏈陽菌素、夫西地酸的耐藥率仍保持在較低水平。
　

5、　2.噬菌蛭弧菌分別與五種臨床常見菌共同培養(yǎng)24h及48h后，多重耐藥組、非多重耐藥組浮游狀態(tài)的OD600值與其初始OD600值相比均顯著降低，差異均具有顯著性。
　　3.研究共篩選得到生物膜形成表型、基因型均陽性的大腸埃希菌16株，肺炎克雷伯菌23株，銅綠假單胞菌23株，鮑曼不動桿菌23株，金黃色葡萄球菌18株。各菌株與噬菌蛭弧菌共同孵育24h后形成的生物膜吸光度（OD570值）與其對應的空白對照組相比，降低了14.4％～44.

6、3％。48h后形成的生物膜吸光度（OD570值）與其對應的空白對照組相比，降低了20.4％～65.2％。
　　4.各實驗菌株預形成的生物膜被噬菌蛭弧菌捕食24h后，吸光度（OD570值）與其對應的空白對照組相比，降低了72.2％～77.6％。48h后各組生物膜吸光度（OD570值）與其對應的空白對照組相比，分別降低了79.9％～83.4％。
　　5.大腸埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC13883、銅綠假單胞菌A

7、TCC27853、鮑曼不動桿菌ATCC19606、金黃色葡萄球菌ATCC25923培養(yǎng)24h后預形成的生物膜，經空白對照組處理后掃描電鏡下仍可見細菌密集排列，層層疊加，團塊內包含大量的生物膜，僅部分區(qū)域略有縫隙。經噬菌蛭弧菌捕食24h后的實驗組可見生物膜的緊密結構被破壞，生物量明顯減少，僅部分區(qū)域殘存聚集的細菌。
　　結論：
　　1.本研究中臨床分離的五種常見細菌:大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌、金黃色