尖孢鐮刀菌拮抗細(xì)菌的篩選與抗菌蛋白的分離.pdf

1、西瓜枯萎病是由尖孢鐮刀菌西瓜?；停‵usarium oxysporumf.sp .niveum）侵染引起的真菌性維管束系統(tǒng)病害，是西瓜生產(chǎn)中毀滅性的病害，給我國(guó)西瓜生產(chǎn)造成嚴(yán)重?fù)p失，嚴(yán)重制約著西瓜生產(chǎn)的發(fā)展。
　　 為了得到對(duì)尖孢鐮刀菌有抑制作用的菌株，本實(shí)驗(yàn)從西瓜根際土壤中分離到346 株細(xì)菌菌株，其中菌株5-20的活性最高。經(jīng)有機(jī)溶劑萃取及鹽析初步確定該菌株產(chǎn)生的拮抗物質(zhì)為蛋白類物質(zhì)。通過對(duì)該菌株進(jìn)行形態(tài)特征觀察、生理生化

2、試驗(yàn)以及16S rDNA的序列比對(duì)分析，確認(rèn)該菌株為Bacillus velezensis。
　　 對(duì)B.velezensis5-20 菌株產(chǎn)抗菌物質(zhì)的液態(tài)發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化，得到了抗菌蛋白的最佳培養(yǎng)基組成為：玉米粉3％、蛋白胨3％、CuSO4·7H2O 0.05％、ZnCl2 0.05％、發(fā)酵液初始pH 值為7.0、裝量75 mL/250 mL、接種量10％、發(fā)酵時(shí)間36 h。優(yōu)化前后蛋白抑菌活性差別明顯，優(yōu)化之前抑菌圈面積37

3、9.94 mm2，優(yōu)化后為509.25 mm2，活性提高了34.03％。
　　 芽孢是微生物菌劑的最佳制劑形式，對(duì)惡劣的環(huán)境因素的具有抗性，可延長(zhǎng)制劑保存期，穩(wěn)定活性。對(duì)B.velezensis5-20 菌株產(chǎn)芽孢條件進(jìn)一步進(jìn)行摸索，為防治西瓜枯萎病的拮抗細(xì)菌進(jìn)入工業(yè)化生產(chǎn)提供理論依據(jù)。產(chǎn)芽孢最適發(fā)酵培養(yǎng)基為：最佳培養(yǎng)基為：
　　 玉米粉0.5％、黃豆餅粉2％、MnSO4 0.3％、FeSO4·5H2O 0.3％；最佳培

4、養(yǎng)條件為：種齡18 h、接種量10％、培養(yǎng)基初始pH 值7.0、裝量75 mL/250 mL、發(fā)酵時(shí)間48 h、溫度30℃、轉(zhuǎn)速220 r/min。在此優(yōu)化條件下，5-20 菌株發(fā)酵液中的菌體芽孢形成率大大提高，最終生物量達(dá)到2×109 cfu/mL，芽孢形成率達(dá)到96.75％。
　　 用硫酸銨沉淀B.velezensis5-20 菌株發(fā)酵液中的蛋白質(zhì)，透析、真空冷凍干燥后檢測(cè)活性，并對(duì)其性質(zhì)進(jìn)行了研究。該抗菌蛋白最適作用溫度為