竹喙球菌拮抗細(xì)菌2-7菌株的分離及抗菌蛋白純化.pdf

1、毛竹（Phyllostachys heterocycla cypubescens）是一個(gè)地域分布廣、經(jīng)營(yíng)周期短、經(jīng)濟(jì)效益高的優(yōu)良樹(shù)種。但20世紀(jì)中葉開(kāi)始毛竹枯梢病相繼在各地暴發(fā)成災(zāi)，造成嚴(yán)重?fù)p失，成為我國(guó)重要檢疫性植物病害。
　　 其病原菌竹喙球菌（Ceratosphaeria phyllostachydis Zhang）是接近于高度危險(xiǎn)的林業(yè)有害生物，對(duì)我國(guó)竹林資源與竹業(yè)發(fā)展具有潛在的嚴(yán)重威脅，應(yīng)加強(qiáng)風(fēng)險(xiǎn)性管理力度。
　

2、　 目前生物防治被認(rèn)為是一種最具有發(fā)展?jié)摿Φ挠行Х乐畏椒ā?br>　　 本研究從土壤中分離獲得一株對(duì)毛竹枯梢病致病菌竹喙球菌具有較強(qiáng)拮抗作用的菌株2-7。通過(guò)對(duì)該菌株進(jìn)行形態(tài)特征觀察、生理生化試驗(yàn)以及16SrDNA的序列比對(duì)分析，鑒定該菌株為巨大芽孢桿菌（Bacillus megaterium）。
　　 經(jīng)鹽析及有機(jī)溶劑萃取初步確定該菌株產(chǎn)生的拮抗物質(zhì)為蛋白類(lèi)物質(zhì)。
　　 通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)對(duì)菌株2-7搖瓶發(fā)酵

3、條件及產(chǎn)芽孢條件進(jìn)行了優(yōu)化，最終確定了其最佳發(fā)酵條件為：蔗糖3％、蛋白胨3％、MgSO4·7H2O0.05％、KCl0.05％、發(fā)酵液初始pH值為7.0、裝瓶量為250mL三角瓶裝50mL、發(fā)酵時(shí)間36h、接種量為10％。在此條件下培養(yǎng)得到的菌株2-7發(fā)酵液，經(jīng)過(guò)濾除菌后以含竹喙球菌的平板檢測(cè)其抑菌活性，抑菌圈直徑可達(dá)27.05mm。
　　 其最佳產(chǎn)芽孢條件為：1％玉米粉、1％大豆蛋白胨、0.1％CaCl2、0.05％MnSO4

4、·H2O、培養(yǎng)基初始pH值為6.0、種齡20h、裝瓶量250mL三角瓶裝50mL、接種量8％、培養(yǎng)溫度為30℃、搖床轉(zhuǎn)速200r·min-1。在此優(yōu)化條件下，2-7菌株發(fā)酵液中的芽孢數(shù)量為2×109個(gè)/mL，芽孢形成率達(dá)到了96.4％。
　　 用硫酸銨沉淀2-7菌株發(fā)酵液中的蛋白質(zhì)，透析、真空冷凍干燥后檢測(cè)活性，并對(duì)其性質(zhì)進(jìn)行了研究。該抗菌蛋白在pH8.0～11.0范圍內(nèi)具有較好的穩(wěn)定性，最適作用溫度為28℃；最適作用pH值為7