生防細(xì)菌W1的種類鑒定及其抗菌蛋白的分離純化與性質(zhì)研究.pdf

1、W1是一株從揚(yáng)州農(nóng)田土壤中分離獲得的生防細(xì)菌，其能產(chǎn)生抗菌蛋白，對(duì)植物病原菌有較好的拮抗作用。為了進(jìn)一步研究利用該生防細(xì)菌，本論文對(duì)細(xì)菌的分類地位、抗菌蛋白分離純化方法、抗菌蛋白理化性質(zhì)以及抑菌特性進(jìn)行了初步研究。 對(duì)生防細(xì)菌W1進(jìn)行了16S rDNA序列分析，結(jié)果顯示該菌與解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amvloliquefaciens)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、莫哈韋芽孢桿菌(Bacillus

2、 mojavensis)、地衣芽孢桿菌(Bacillus lichenifrmis)和Bacillus velezensis五個(gè)種細(xì)菌的序列有較高的同源性，同源性分別為100％、99％、99％、98％和98％。W1菌株的表型特征為具有好氧性，能液化明膠，這些特征與枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌類似。根據(jù)16S rDNA序列的相似性與生物學(xué)性狀比較，W1菌株與解淀粉芽孢桿菌較為接近，因此初步將其定為解淀粉芽孢桿菌。 W1菌株培養(yǎng)濾液

3、中的抗菌蛋白可以30％硫酸銨完全沉淀，沉淀物經(jīng)透析后得粗蛋白。粗蛋白經(jīng)Sepharose Fast Flow離子交換柱層析在280nm處有四個(gè)吸收峰，其中峰D對(duì)供試病菌(棉花枯萎病菌．Fsarium oxysporum f.sp.vasinfectum)具有明顯的抑菌活性，且含量最高，其余峰均無(wú)抑菌活性。收集的峰D物質(zhì)再經(jīng)SephadexG-75凝膠柱層析在280nm．處有三個(gè)吸收峰，其中只有峰D-1具抑菌活性，含量最高。收集峰D-1即

4、為精蛋白。對(duì)精蛋白進(jìn)行SDS-PAGE，僅出現(xiàn)一條蛋白帶。這表明用以上方法可以從W1培養(yǎng)濾液中提取到較純的抗菌蛋白。 經(jīng)理化測(cè)定，生防細(xì)菌W1抗菌蛋白分子量為40,856Da，等電點(diǎn)為6.56；該蛋白中含有脯氨酸或羥脯氨酸，沒(méi)有苯環(huán)結(jié)構(gòu)，不含有脂基，但含糖基，含糖量達(dá)35.0％。 提取的抗菌蛋白對(duì)棉花枯萎病菌具有明顯的破壞菌絲形態(tài)和抑制生長(zhǎng)的作用。對(duì)菌絲形態(tài)的破壞作用主要表現(xiàn)為菌絲原生質(zhì)收縮、菌絲細(xì)胞膨大成泡囊狀、細(xì)胞壁