兔腸源抗菌蛋白的分離純化及其生物活性研究.pdf

1、為開發(fā)制備一種新型的兔腸源抗菌蛋白，本試驗(yàn)將兔小腸組織勻漿，經(jīng)高溫處理，乙酸浸提后，然后對(duì)蛋白組分進(jìn)行分離純化，得到一種純的兔腸源抗菌蛋白，通過對(duì)兔腸源抗菌蛋白的抗菌活性和抗病毒活性的初步研究，以及與常規(guī)抗生素的比較研究，初步確定了兔腸源抗菌蛋白在細(xì)菌性疫病防治方面、以及抗菌藥物和抗病毒藥物方面的應(yīng)用前景。 本課題主要研究?jī)?nèi)容包括以下幾個(gè)方面： 1．一種兔腸源抗菌蛋白分離純化及抑菌活性的研究為探討兔腸道組織抗菌有效成分的

2、組成及其性質(zhì)，本試驗(yàn)將新鮮兔小腸組織勻漿，經(jīng)高溫處理，乙酸浸提后，檢測(cè)抗菌活性，再經(jīng)SephadexGl00和SephadexG75凝膠柱過濾層析，收集具有抗菌活性的蛋白組分，經(jīng)SDS-PAGE電泳，考馬斯亮藍(lán)染色后，為一條蛋白帶，其相對(duì)分子質(zhì)量約為43×10<'3>。用瓊脂糖彌散法和活菌計(jì)數(shù)試驗(yàn)檢測(cè)純化物對(duì)9株細(xì)菌(大腸桿菌8099株、ATCC35218株及地方分離株JN101，金黃色葡萄球菌ATCC653 8株、ATCC25923株

3、及地方分離株JN102，綠膿桿菌ATCC9027株，白色念珠菌ATCC10231株，白色葡萄球菌8032株)的抑菌作用。純化的兔腸源抗菌蛋白對(duì)9株細(xì)菌的均有明顯的抑菌作用，殺菌率介于78％與98％之間，顯示了較強(qiáng)的抗菌活性。初步顯示了兔腸源抗菌蛋白在細(xì)菌性疫病的防治方面的應(yīng)用前景。 2．兔腸道組織提取物與抗生素抗菌活性的比較研究為了對(duì)兔腸道組織抗菌有效成分進(jìn)行定量研究，將新鮮兔小腸組織勻漿機(jī)勻漿，經(jīng)高溫處理，乙酸浸提后，檢測(cè)抗菌

4、活性，收集具有抗菌活性的兔腸道組織提取物，采用瓊脂糖彌散試驗(yàn)，使用兔腸道組織提取物和常見抗生素(青霉素、紅霉素、環(huán)丙沙星、慶大霉素、丁胺卡那霉素、磺胺甲嗯唑)分別對(duì)大腸桿菌8099株、金黃色葡萄球菌ATCC6538株、綠膿桿菌ATCC9027株、白色葡萄球菌8032株作抑菌對(duì)比試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：試驗(yàn)結(jié)果表明，兔腸道組織提取物的抗菌活性分別等效于不同濃度，不同種類的抗生素，使用兔腸道組織提取物替代抗生素治療某些細(xì)菌性疾病是可能的，初步顯

5、示了它在抗菌藥物方面的應(yīng)用前景。 3．兔腸源抗菌蛋白對(duì)病毒作用的初步研究為研究兔腸源抗菌蛋白的抗病毒活性，將新鮮兔小腸組織勻漿，經(jīng)高溫處理，乙酸浸提后，檢測(cè)其抗菌活性，再經(jīng)SephadexG100和SephadexG75凝膠柱過濾層析，收集具有抗菌活性的蛋白組分，將雞新城疫病毒強(qiáng)毒株病毒液用滅菌生理鹽水稀釋至200倍LD<,50>(雞胚LD<,50>)濃度，然后用適宜濃度的抗菌蛋白處理病毒液，雞胚接種，雞胚孵化至第80h，收集尿囊液，用

6、血凝試驗(yàn)檢測(cè)雞胚尿囊液中的新城疫病毒血凝效價(jià)，雞胚固定、組織切片觀察，兔腸源抗菌蛋白處理后的NDV接種雞胚后，雞胚發(fā)育基本正常，無明顯病變。而未經(jīng)處理的NDV接種雞胚后，病變比較嚴(yán)重，雞胚發(fā)育不良。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：使用兔腸道組織提取物替代某些抗病毒藥物治療某些病毒性疾病是可能的，初步顯示了它在抗病毒藥物方面的應(yīng)用前景。 綜上所述，本研究首次由兔腸道組織中分離純化了兔腸源抗菌蛋白，并證明兔腸源抗菌蛋白具有抗菌、抗病毒作用。首次揭示了