菊花多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定及其生物活性研究.pdf

1、菊花系菊科植物菊（Chrysanthemum morifolium Ramat.）的干燥頭狀花序，是一味藥食同源的，具有悠久藥用歷史的清熱解毒中草藥。中醫(yī)藥理論認(rèn)為，菊花具有散風(fēng)清熱、平肝明目的功效，主要用于頭痛眩暈、眼目昏花、目赤腫痛、風(fēng)熱感冒等癥。藥理學(xué)研究已經(jīng)證實(shí)菊花具有抗腫瘤、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等多種生物功能。但目前對菊花化學(xué)成分和藥理作用的研究多集中于黃酮、黃酮苷、萜類（特別是揮發(fā)油）和微量元素等小分子化合物，而對菊花中多糖等大

2、分子化合物鮮有相關(guān)深入報道。菊花在臨床中多以水煎劑入藥，多糖作為其中的重要成分之一，其化學(xué)結(jié)構(gòu)和藥理活性有待于深入研究，從而能合理的開發(fā)和利用菊花多糖，促進(jìn)更好的發(fā)揮菊花的藥用價值。為此，我們對菊花中的多糖進(jìn)行了提取、分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定和衍生物的制備（如硫酸化、羧甲基化等），并通過免疫模型、抗氧化模型以及抗血管生成模型對其生物活性進(jìn)行了探討。
　　本課題采用3.8 kg干燥的懷菊花藥材，分別經(jīng)過沸水提取和5％的氫氧化鈉提取乙醇沉淀

3、法，獲得了沸水提取粗多糖CMJA（295 g，產(chǎn)率7.8%）和堿提取粗多糖JHB（96 g，產(chǎn)率2.5%）。粗多糖CMJA經(jīng)DEAE-纖維素陰離子交換樹脂和凝膠滲透色譜Sephacryl S-300 HR分離純化獲得了八種均一多糖組分，分別為：CMJA0S1（110 mg，產(chǎn)率0.4%），CMJA0S2（616 mg，產(chǎn)率2.2%），CMJA1aS2（650 mg，產(chǎn)率2.3%），CMJA1aS3（104 mg，產(chǎn)率0.4%），CMJA

4、1bS2（150 mg，產(chǎn)率0.5%），CMJA1bS3（550 mg，產(chǎn)率2.0%），CMJA2S2（570 mg，產(chǎn)率2.0%）和CMJA2S3（610 mg，產(chǎn)率2.2%）。粗多糖JHB經(jīng)DEAE-纖維素陰離子交換樹脂和凝膠滲透色譜Sephacryl S-200 HR分離純化獲得了均一多糖組分JHB0S2（532 mg，產(chǎn)率1.9%）。
　　經(jīng)過單糖組成分析、甲基化GC-MS分析、部分酸水解等化學(xué)方法以及IR、NMR等光譜學(xué)

5、方法，對這些多糖的一級結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，CMJA0S1是一種分子量為4.7×104 Da的阿拉伯半乳聚糖。CMJA0S2的分子量為6.5×103 Da，主鏈為由1,4-β-Glcp，1,4-β-Galp，1,4-β-Manp組成的半乳甘露葡聚糖，并具有1,6-β-Galp，T-α-Glcp，T-α-Araf，1,5-α-Araf等構(gòu)成的支鏈。CMJA1aS2，CMJA1aS3，CMJA1bS2，CMJA1bS3和CMJA2S2是

6、一系列不同分子量的RG-I型果膠多糖，它們的半乳糖醛酸含量和支鏈糖基組成各有不同，以1,2-α-Rhap和1,4-α-GalAp組成主鏈，并且在鼠李糖的O-4位具有阿拉伯糖、半乳糖等構(gòu)成的支鏈。CMJA2S3是分子量為1.1×104 Da，由半乳糖醛酸組成的HG型果膠多糖。JHB0S2是分子量為1.6×104 Da的木葡聚糖，以1,4-β-Glcp構(gòu)成主鏈，在O-6位有分支，連接木糖殘基。
　　基于NF-κB的免疫激活測試表明，菊

7、花多糖能激活核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB，具有較強(qiáng)的免疫活性。采用DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)和對H2O2誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)證明了菊花多糖具有抗氧化活性。尤其以半乳甘露葡聚糖為主鏈的CMJA0S2的抗氧化作用最強(qiáng)，當(dāng)濃度為1.0 mg/ml時，DPPH自由基清除率和PC12細(xì)胞存活率分別高達(dá)81%和98%。此外，通過HMEC-1細(xì)胞抗血管生成模型測試，揭示了木葡聚糖JHB0S2以及采用氯磺酸吡啶法制得的硫酸化衍生物JHB0S2-su