海蜇多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定及免疫活性研究.pdf

1、海蜇是一種藥食兩用的海洋生物，是我國傳統(tǒng)漁業(yè)生產(chǎn)的主要大型食用水母。研究表明，多糖是海蜇的主要活性物質(zhì)之一。本課題組前期的研究發(fā)現(xiàn)海蜇粗多糖具有免疫調(diào)節(jié)活性，本文以此為基礎(chǔ)，以海蜇為原材料，重點開展了海蜇多糖的提取、分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定和免疫活性方面的研究，主要實驗結(jié)果如下:
　　(1)海蜇經(jīng)水提醇沉獲得總多糖，利用DEAE Cellulose DE52離子交換層析和Sephacryl S-500凝膠滲透色譜柱對總多糖進行分離純化，

2、獲得一種均一組分海蜇多糖JSP11，相對分子質(zhì)量為1.25×106 Da。
　　(2)單糖組成分析顯示，JSP11是由甘露糖、半乳糖和葡萄糖醛酸組成，其分子摩爾比為2.18∶1.00∶1.94。甲基化實驗結(jié)果表明，JSP11包含1，3，6-Manp、1，6-Galp和1-GlcpA三種糖苷鍵連接方式，各糖殘基的組成摩爾比為1.98∶1.00∶2.03。依據(jù)JSP11的基本結(jié)構(gòu)特征，并結(jié)合NMR分析的結(jié)果，對JSP11中單糖殘基的C

3、、H化學(xué)位移進行了歸屬，并對不同糖苷鍵的連接順序進行了確證。
　　(3) MTT實驗結(jié)果說明在10～200μg/mL濃度范圍內(nèi)，JSP11能促進RAW264.7巨噬細胞的生長，無細胞毒性。NO和細胞因子的含量分析顯示，JSP11在10～200μg/mL濃度范圍內(nèi)能促進RAW264.7巨噬細胞產(chǎn)生NO、TNF-α和IL-1β，且呈劑量依賴性，當(dāng)JSP11劑量達到200μg/mL時，NO、TNF-α和IL-1β的產(chǎn)生量分別比對照組提高

4、了140％、77％和53.8％，表明JSP11具有免疫調(diào)節(jié)活性。PMB屏蔽實驗證明JSP11未受LPS的污染。熒光定量RT-PCR實驗表明，JSP11能誘導(dǎo)iNOS、TNF-α和IL-1β mRNA在RAW264.7細胞中的表達，且呈量效關(guān)系。Western Blot實驗結(jié)果表明，JSP11促進NF-κB p65的核移位，與對照組相比，多糖處理組p-P38、p-ERK1/2、p-JNK和p-Akt的蛋白表達量明顯提高，說明JSP11能通