茶樹(shù)花多糖的提取、分離純化、結(jié)構(gòu)及其生物活性.pdf

1、茶樹(shù)花是茶(Camellia sinensis)樹(shù)的生殖器官,屬多年生草本植物,原產(chǎn)我國(guó)。茶樹(shù)花含有多種有益成分,但是對(duì)其開(kāi)發(fā)利用尚不充分。許多學(xué)者已經(jīng)證實(shí)多糖具有多樣的生理功能。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)茶樹(shù)花多糖的研究報(bào)道較少,且不夠系統(tǒng)。因此,本論文重點(diǎn)研究了茶樹(shù)花多糖的提取與分離純化,測(cè)定其體外抗氧化活性、體內(nèi)肝保護(hù)活性以及體外抗腫瘤活性,并對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步鑒定。
　　 1.以茶樹(shù)花為原材料,采用高效液相色譜法測(cè)定了茶樹(shù)花中可溶性糖

2、、兒茶素和游離氨基酸的含量。茶樹(shù)花中含有216.85 mg/g的可溶性糖,其花冠、雄蕊群和雌蕊群部分(F-1)及花托、萼片和花梗部分(F-2)的含量分別為250.94和112.65 mg/g；茶樹(shù)花中總兒茶素含量為37.03 mg/g,且F-2中的含量(46.90 mg/g)高于F-1(30.88mg/g)；茶樹(shù)花中含有包括茶氨酸在內(nèi)的16種游離氨基酸,含量為10.87 mg/g,雖然F-2中游離氨基酸的種類(lèi)較少,但其含量(16.47m

3、g/g)顯著高于F-1(10.59mg/g)。
　　 2.取茶樹(shù)花粉末以85％乙醇進(jìn)行脫脂、去色素等預(yù)處理后90℃水浴浸提3次,離心取上清液,濃縮后乙醇沉淀、冷凍干燥后得茶樹(shù)花粗多糖,得率為6.67-6.89％。利用DEAE-纖維素-52層析柱對(duì)茶樹(shù)花粗多糖進(jìn)行初步分離,得到三個(gè)組分TFPS-1、TFPS-2和TFPS-3。對(duì)茶樹(shù)花粗多糖、TFPS-1、TFPS-2和TFPS-3進(jìn)行了初步理化性質(zhì)的研究,其總糖含量分別為29.8

4、0％、63.90％、34.94％和28.99％；其蛋白含量分別為5.05％、2.53％、2.37％和2.31％；其糖醛酸含量分別為22.75％、1.40％、37.69％和31.26％；其硫酸基含量分別為1.45％、2.63％、0.84％和1.76％。
　　 3.運(yùn)用化學(xué)方法分別測(cè)量分析了粗TFPS、TFPS-1、TFPS-2和TFPS-3的體外抗氧化活性。結(jié)果表明:粗TFPS、TFPS-1、TFPS-2和TFPS-3體外能夠清除

5、DPPH·自由基、清除O2·自由基、清除HO·自由基、螯合Fe2+、還原Fe3+,具有一定的體外抗氧化活性。其中,粗TFPS具有較強(qiáng)的抗氧化效果；TFPS-1具有較強(qiáng)的清除DPPH·自由基活性與螯合Fe2+的能力；TFPS-3具有較強(qiáng)的清除O2·自由基活性和清除HO·自由基的活性。
　　 選用小白鼠動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)研究分析了粗TFPS的體內(nèi)肝保護(hù)活性。結(jié)果表明:應(yīng)用粗TFPS處理可有效保護(hù)CCl4誘發(fā)的急性肝損傷；其中應(yīng)用中劑量粗T

6、FPS處理的效果最好,可以顯著地抑制血清中ALT和AST的活性,顯著地提高肝臟中SOD活性和GSH-Px活性以及降低肝臟中MDA的生成。
　　 運(yùn)用MTT法研究分析了粗TFPS、TFPS-1、TFPS-2和TFPS-3對(duì)胃癌細(xì)胞BGC-823的體外抑制作用。結(jié)果表明:TFPS-1和TFPS-3表現(xiàn)出較好的抑制活性,在200μg/ml培養(yǎng)了72h的條件下,其抑制率分別達(dá)到82.60％和83.73％。
　　 4.采用氣相色譜

7、法分析茶樹(shù)花多糖的單糖組成,粗多糖單糖組成及摩爾比為鼠李糖:阿拉伯糖:巖藻糖:木糖:甘露糖:葡萄糖:半乳糖=10.17:49.52:2.58:1.49:2.68:11.54:22.04；TFPS-1單糖組成及摩爾比為阿拉伯糖:巖藻糖:木糖:甘露糖:葡萄糖:半乳糖=14.84:2.64:12.16:6.87:45.39:18.08；TFPS-2單糖組成及摩爾比為鼠李糖:阿拉伯糖:半乳糖=11.19:55.16:33.65；TFPS-3單糖

8、組成及摩爾比為鼠李糖:阿拉伯糖:半乳糖=20.95:53.34:25.71。
　　 通過(guò)紅外吸收光譜法(IR)分析得知茶樹(shù)花多糖(粗TFPS、TFPS-1、TFPS-2和TFPS-3)在4000 cm-1-400 cm-1范圍內(nèi)呈現(xiàn)出典型的多糖吸收峰,說(shuō)明這四種檢測(cè)樣品為多糖類(lèi)物質(zhì)。
　　 采用高效凝膠過(guò)濾色譜法(HPGFC)對(duì)TFPS-1、TFPS-2和TFPS-3的純度進(jìn)行了測(cè)定,結(jié)果表明:TFPS-3具有均一的分布