短短芽孢桿菌XDH的鑒定及其抗菌物質(zhì)的分離、純化與部分性質(zhì)研究.pdf

1、a'311菌株是本實驗室從泰山土壤分離獲得的一株拮抗細菌。該菌株對多種動、植物病原細菌和真菌如：大腸桿菌、雞巴氏桿菌、金黃葡萄球菌、黑胸敗血病菌、棉花枯萎病菌、黃瓜枯萎病菌、茶輪斑病菌等有較強拮抗作用，該菌株抑菌譜廣，菌株發(fā)酵性狀優(yōu)異，發(fā)酵液性質(zhì)穩(wěn)定，顯示了誘人的開發(fā)前景。本文通過菌體形態(tài)特征觀察、生理生化指標測定和16SrDNA序列分析，對該菌株進行了鑒定。選擇了適合該菌株的發(fā)酵條件，并通過硫酸銨沉淀、SephadexG-50柱層析、

2、高效液相色譜(HPLC)和質(zhì)譜(MS)分析，對抗菌物質(zhì)進行了分離純化，并研究了其部分性質(zhì)。主要內(nèi)容如下： 1通過菌體形態(tài)特征觀察、生理生化指標測定、16SrDNA序列及其系統(tǒng)進化樹分析，鑒定a'311菌株為短短芽孢桿菌(Brevibacillusbrevis)，命名為短短芽孢桿菌XDH。該菌株的16SrDNA序列已在美國Genbank注冊，登錄號為DQ279738。 2篩選到一個適合該菌株的發(fā)酵條件。培養(yǎng)基配方：葡萄糖1

3、6g，可溶性淀粉2.5g，蛋白胨10g，黃豆餅粉26g，玉米漿1.0g，NaCl7.5g，(NH4)2SO44.0g，蒸餾水1000mL。30℃，200rpm，裝液量50mL/250mL，搖瓶振蕩培養(yǎng)48h。 3發(fā)酵液經(jīng)40％飽和度硫酸銨鹽析和SephadexG-50柱層析，可將有效物質(zhì)與其他組分進行粗分離。以乙腈-0.1％TFA水溶液和甲醇-0.4％乙酸水溶液為流動相，選擇合適的HPLC條件，確定最佳HPLC條件為甲醇：0.4

4、％乙酸(28：72，v/v)，色譜柱KromasilC18柱(250×4.6mm，5μm)，流速1.0mL/min，柱溫30℃，270nm檢測。HPLC分析結(jié)果表明，得到至少A、B兩個有效組分，其保留時間分別是6.225min和10.899min，這使得抗菌物質(zhì)的分離純化更進一步。質(zhì)譜分析表明，A、B兩組分的分子量分別是218和392。 4抗菌物質(zhì)粗品在水、甲醇、乙醇中溶解度較大，丙酮和乙醚中次之，在氯仿和苯中不溶解；茚三酮反應

5、為陰性；耐高溫；對酸敏感；對蛋白酶和紫外線照射不敏感；在270nm和220nm附近有最大紫外吸收。 5該菌株抑菌譜廣，對多種病原細菌和真菌有拮抗作用。其中，抗菌物質(zhì)對黑胸敗血病菌的MIC為1.1719μg/mL，MBC為2.3438μg/mL；對雞白痢沙門氏菌的MIC為0.6274μg/mL，MBC為1.2548μg/mL；對大腸桿菌的MIC為2.3438μg/mL，MBC為4.6875μg/mL；對金黃葡萄球菌的MIC為9.3