番茄灰霉生防菌B21的分子鑒定及其抗菌蛋白的分離純化.pdf

1、該研究以從植物葉片上篩選出的具有強(qiáng)烈抑制番茄灰霉病生長(zhǎng)并產(chǎn)生大量頡頏物質(zhì)的頡頏細(xì)菌B21為實(shí)驗(yàn)材料.通過部分田間試驗(yàn)、B21的分子鑒定、對(duì)抗菌蛋白的特性分析和抗菌蛋白的分離純化,主要明確了以下問題:利用B.subtilis B21菌株的培養(yǎng)液進(jìn)行田間防病試驗(yàn)結(jié)果表明,頡頏細(xì)菌B21懸浮液對(duì)番茄灰霉病有較好的防治效果,其發(fā)酵液原液、5倍稀釋液和10倍稀釋液三個(gè)處理在葉期的防病效果分別為67.21％、63.57%和51.02%,均高于對(duì)照藥

2、劑多菌靈500倍液(42.26%),達(dá)極顯著水平.其中B21發(fā)酵液5倍稀釋處理的防效與10倍處理的防效差異顯著,而與發(fā)酵原液處理的防效處于同一水平.在果期能顯著降低病果率,B21發(fā)酵液原液、5倍稀釋液和10倍稀釋液三種濃度處理的病果率分別為7.5%、9.6%和13.23%.該實(shí)驗(yàn)在原來研究的基礎(chǔ)上利用PCR技術(shù)對(duì)菌株B21 16S rDNA序列作全序列分析,序列結(jié)果在GeneBank中進(jìn)行Blast同源序列檢索,再用DNAStar軟件與

3、Bacillus屬的其它種進(jìn)行同源性分析,結(jié)果顯示B21與已報(bào)道的B.subtilis16S rDNA序列(登陸號(hào)AY172513)有99.93%的相似性,且兩者在系統(tǒng)發(fā)育樹中處于同一個(gè)分支.確定B21為B.subtilis的一個(gè)菌株.利用飽和硫酸銨鹽析,獲得粗提蛋白.該頡頏蛋白80℃處理30 min后,活性顯著下降,只是保持部分頡頏活性,100℃處理30 min后喪失頡頏活性,表明不耐高溫;對(duì)胰蛋白酶和蛋白酶K部分敏感,對(duì)鏈霉蛋白酶不