銀杏種仁抗菌肽的分離純化、性質(zhì)鑒定及其總RNA提取.pdf

1、抗菌肽(Antimicrobialpeptides，AMPs)也稱為肽類抗生素(Peptideantibiotics)或天然抗生素(Naturalantibiotics)，是一類對細(xì)菌、真菌等微生物及某些昆蟲和動(dòng)植物細(xì)胞具有抑制作用的小分子多肽。研究抗菌肽為開發(fā)新的抗菌素、抗病毒和腫瘤抑制劑開辟了廣闊的前景。本實(shí)驗(yàn)的目的旨在從銀杏果仁中分離純化出一種抗菌肽、對其性質(zhì)進(jìn)行研究，并建立從銀杏種仁中反轉(zhuǎn)錄克隆cDNA的方法體系，為克隆基因和研

2、究其抗菌機(jī)理奠定基礎(chǔ)。 本實(shí)驗(yàn)以銀杏種仁為研究材料，以常壓柱層析法、離心式離子交換層析加電洗脫法、AKTA柱層析法等三種方法從銀杏種仁中提取出一種抗菌肽，并對其純度、分子量、抗菌活性、熱穩(wěn)定性、對極端pH值的抗性、對高鹽濃度的抗性等性質(zhì)進(jìn)行了分析。通過異硫氰酸胍法、TRIzoL法，CTAB法以及SDS法分別提取銀杏種仁的總RNA，建立反轉(zhuǎn)錄體系。主要獲得以下結(jié)果： 1、三種方法純化出銀杏種仁抗菌肽，此蛋白在SDS-PAG

3、E上顯示單條帶，表觀分子量為13000Da。AKTA柱層析法所得蛋白在雙向電泳中達(dá)到單點(diǎn)純。 2、該蛋白在離子交換層析中以高鹽濃度被洗脫，是一種堿性蛋白。對照其雙向電泳圖譜，其等電點(diǎn)在9.8左右。 3、純化的蛋白對黃瓜鐮刀孢菌(Fusariumoxysporum)、辣椒早疫病菌(Alternariasolani)、小麥赤霉病菌(Fusariumgraminearum)、葡萄灰霉病菌(BotrytiscinereaPets

4、)、黃瓜炭疽病菌(Colletotrichumlagenarium)等14種真菌有抑制作用。 4、該蛋白濃度達(dá)到2.5mg/ml以上即表現(xiàn)出明顯的抑菌活性。具有較高熱穩(wěn)定性，在90℃處理30min對黃瓜鐮刀孢菌抑菌活性無明顯變化。在酸性條件下，對供試的黃瓜鐮刀孢菌有很強(qiáng)的抑菌活性。對革蘭氏陽性菌代表菌金黃色葡萄球菌和革蘭氏陰性菌代表菌大腸桿菌均有一定的抑制作用。 5、CTAB法提取得總RNA純度高，完整性好，可用于反轉(zhuǎn)錄