福壽螺抗菌肽的分離純化及其抗菌效果的研究.pdf

1、本試驗(yàn)以淡水福壽螺為研究對(duì)象，對(duì)其身體各個(gè)組織及其組織液抗菌肽成分進(jìn)行了提取和分離，并對(duì)體外抗菌活性進(jìn)行了研究。主要研究分為以下幾個(gè)部分： 試驗(yàn)1：福壽螺抗菌物質(zhì)分離方法的探討目的：對(duì)福壽螺體內(nèi)抗菌物質(zhì)分離的初步探索。方法：本試驗(yàn)采用硫酸銨提取法、甲醇浸提法、Tris-HCL 浸提法、改進(jìn)的乙酸提取法四種不同的方法對(duì)福壽螺的腸道，組織液，肝和肌肉組織分離抗菌肽，研究福壽螺體內(nèi)產(chǎn)生抗菌肽的能力和抗菌效果．結(jié)果：用大腸桿菌和金黃色葡

2、萄球菌為指示菌，乙酸浸提法能分離出具有抗菌活性的粗提物，同時(shí)以福壽螺的組織液和腸提取物的抗菌效果明顯，而其它三種方法均不能從福壽螺體內(nèi)分離抗菌物質(zhì)。結(jié)論：乙酸浸提法可從福壽螺的組織液和腸組織中分離出抗菌物質(zhì)。 試驗(yàn)2：福壽螺抗菌肽的純化目的：研究福壽螺抗菌肽純化的最佳方法。方法：采用sephadexG-100凝膠柱過濾層析福壽螺抗菌肽，層析柱規(guī)格為2.5×60cm，洗脫液為0.2mol/L的氯化鈉溶液，流速為0.6 ml/min

3、，8 min/管。結(jié)果：分離效果比較明顯，峰之間區(qū)分非常明顯，其中活性峰為Ⅱ峰的27～32管。 試驗(yàn)3：福壽螺抗菌肽鑒定和性質(zhì)的研究目的：對(duì)分離純化的福壽螺抗菌物質(zhì)進(jìn)行鑒定。方法：選用聚丙烯酰胺凝膠電泳、SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳、溫度、pH值對(duì)福壽螺抗菌物質(zhì)進(jìn)行鑒定。結(jié)果：分離的抗菌肽的電泳圖譜為單一條帶，其分子量約為5000～7000 Da；40℃-80℃處理30min其抗菌活性基本沒有變化，90℃處理30min抗菌活性略有

4、下降；在pH6.5～7.5的近中性環(huán)境中，福壽螺抗菌肽的抗菌活性最強(qiáng)，偏酸性(pH<6.0)或偏堿性(pH>8.0)的溶劑環(huán)境均可導(dǎo)致福壽螺抗菌肽的抗菌活性降低。結(jié)論：分離純化的抗菌物質(zhì)是一種單一、耐熱的、小分子的肽類。 試驗(yàn)4：福壽螺抗菌肽抗菌譜的測(cè)定及抗菌機(jī)制的研究目的：研究福壽螺抗菌肽的抗菌譜和抑菌機(jī)制。方法：瓊脂糖彌散抗菌法測(cè)定大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、嗜水氣單胞菌、枯草桿菌的最小抑菌濃度；應(yīng)用掃描電鏡方法觀察抗菌肽對(duì)大