牙鲆抗菌肽Hepcidin基因的表達(dá)分析及真鯛重組抗菌肽的抗菌活性研究.pdf

1、抗菌肽(Antimicrobialpeptides)，是生物免疫防御系統(tǒng)的重要組成，廣泛分布于多種生物，具有分子量小、耐熱、廣譜抗菌等特性。本文研究了牙鲆抗菌肽Hepcidin基因在不同發(fā)育時(shí)期胚胎中和在不同組織中的表達(dá)分析以及真鯛重組抗菌肽Hepcidin的抗菌活性。 采集牙鲆不同發(fā)育時(shí)期的胚胎樣品，依次為受精后：4小時(shí)(2-8細(xì)胞期)、20小時(shí)(原腸期)、36小時(shí)(神經(jīng)胚期)、44小時(shí)(肌節(jié)期)、52小時(shí)(尾芽期)、68小時(shí)

2、(心跳期)、80小時(shí)(魚苗期)；采集牙鲆成魚肝臟(Liver)、脾臟(Spleen)、小腸(Intestine)、鰓(Gill)、心臟(Heart)和頭腎(HeadKidney)組織樣品。利用Trizol試劑盒提取RNA，進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，隨后通過特異性引物擴(kuò)增Hepcidin基因和內(nèi)參β-actin基因，分析牙鲆抗菌肽Hepcidin基因在不同發(fā)育時(shí)期胚胎中和在不同組織中的表達(dá)。結(jié)果表明在牙鲆胚胎發(fā)育過程中Hepcidin的表達(dá)

3、量隨發(fā)育時(shí)間的增加而逐漸增強(qiáng)，在魚苗期達(dá)到最大；在成魚不同組織中的表達(dá)量也存在很大差別，在肝臟、脾臟和頭腎中表達(dá)量較大，在心臟、鰓中的表達(dá)量較少，而在小腸中幾乎沒有。 用數(shù)種革蘭氏陽性菌、陰性菌和水產(chǎn)動(dòng)物病原菌作為供試菌株對(duì)真鯛重組抗菌肽Hepcidin的誘導(dǎo)表達(dá)上清及超濾濃縮液進(jìn)行抗菌活性研究。結(jié)果表明重組抗菌肽對(duì)大腸桿菌Escherichiacoli(ATCC25922)、綠膿桿菌Pseudomonasaeruginosa(