豬血中抗菌肽的提取及體外抗菌活性研究.pdf

1、抗菌肽是生物體內(nèi)誘導(dǎo)表達具有廣譜抗菌活性的小分子多肽。這些多肽是生物體非專一性的免疫應(yīng)答產(chǎn)物，是生物體內(nèi)免疫系統(tǒng)的重要成分。 目前國內(nèi)關(guān)于豬源抗菌肽的研究，主要針對于豬的小腸中的抗菌肽，而豬血中抗菌肽的提取及抗菌活性研究在國外雖已有少量報道，在國內(nèi)卻未見報道。由于豬血液中自細胞是免疫系統(tǒng)中起主要作用的免疫細胞，而其中性粒細胞約占白細胞總量的70％，從豬血液中性粒細胞中分離提取抗菌肽也就比較合理。因此本實驗采用從豬血液中性粒細胞中

2、分離提取小分子多肽，根據(jù)小分子多肽抗菌活性特點進而分離鑒定出抗菌多肽。同時，通過優(yōu)化提取工藝，提高抗菌肽的得率和含量。 1.提取部分 本實驗以新鮮豬血中性粒細胞中的活性小分子多肽為研究對象，取新鮮豬血抗凝、離心，再經(jīng)超聲波處理、乙酸浸提，又經(jīng)葡聚糖凝膠Sephadex G25、Sephadex G100的過濾層析，超濾裝置分離20KD以下的小分子多肽，并將每一步收集的組分測定其抗菌活性，收集具有抗菌活性的部分。將具有活性

3、的組分進行Tricine SDS-PAGE電泳，分析獲得兩條主帶，分子量分別約為6KD和15KD。再做AU-PAGE電泳，獲得的膠使用凝膠覆蓋測定法測定兩條主帶的抗菌活性，最終確定分子量約為6KD的小分子多肽具有抗菌活性。 2.抑菌試驗部分鑒于現(xiàn)在已知的抗菌肽大多只在體外具有抗菌活性，而在動物體內(nèi)幾乎沒有活性，本實驗只進行了體外抗菌活性試驗。為確定抗菌肽具有廣譜抗菌活性的特點，本實驗針對多種不同性質(zhì)的菌株進行了抗菌活性測定。結(jié)果