魚鱗抗菌肽制備及抗菌包裝應用研究.pdf

1、我國是草魚食用大國，魚鱗作為高產(chǎn)低值的下腳料之一，因富含膠原蛋白而具有較高的研究和開發(fā)價值。本文以草魚魚鱗為原料采用響應面法優(yōu)化抗菌肽制備工藝、粗分離后對其性狀表征、并與可食用膜相結合進行應用研究，不僅合理利用了工業(yè)廢料還開發(fā)了一種新型的天然抗菌劑。
　　1.抗菌肽（Antimicrobial peptides，AMPs）分兩步制備:超聲輔助酸法提取膠原蛋白、酶解制備抗菌肽。為了提高抑菌性選取胃蛋白酶、胰蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋

2、白酶分別酶解魚鱗得到抗菌肽，抑菌試驗結果表明:酸性蛋白酶酶解產(chǎn)物抑菌性最好。響應面優(yōu)化制備工藝得到:超聲時間8.06 min，pH2.56，酶解時間1.44 h，酶解溫度39.5℃，在此條件下酶解產(chǎn)物對大腸桿菌抑菌圈直徑為35.14 mm而預測值為35.03 mm，結果表明該回歸模型可信度高。
　　2.最佳工藝條件下制備粗酶液依次經(jīng)葡聚糖凝膠G-100與葡聚糖凝膠G-50分離純化得到G2組分，蛋白質溶度由20.90 mg/mL降至

3、1.57 mg/mL，說明初分離能除去大量雜蛋白。抑菌試驗表明:G2組分熱穩(wěn)定性及低溫穩(wěn)定性良好，但酸堿穩(wěn)定性差在pH達到5時即失去抑菌性。G2組分對大腸桿菌、副溶血性弧菌、希瓦氏菌的最小殺菌濃度(MBC)為62.50μg/mL高于金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、沙門氏菌32.25μg/mL，對以上六種菌最小抑菌濃度(MIC)為7.81μg/mL;在2MIC、MIC、1/2MIC濃度下均能影響細菌生長曲線即延遲期增長，對數(shù)期縮短甚至無對數(shù)

4、期出現(xiàn)。
　　3.運用單因素和正交試驗優(yōu)化以粗酶液、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、海藻酸丙二醇酯(PGA)為成膜基質的復合膜制備工藝，以甘油為增塑劑，CaCl2交聯(lián)改性后測定膜的物理性能及抑菌性能。正交試驗結果為:甘油添加量為干物質重0.1倍，PGA溶液(2％w/v)及HPMC溶液(2％w/v)添加量均為120 g，粗酶液添加量為3 mL;在此條件下對大腸桿菌抑菌圈直徑為24.75 mm，抗拉伸強度為8.87Mpa，水蒸氣透過量為

5、35.2 g/(m2×d)。FTIR、DSC分析得出大分子間相互作用形成新的穩(wěn)定體系，復合膜相容性良好。
　　4.以pH、TVB-N、菌落總數(shù)、感官評分為指標，空白對照不做任何處理、陰性對照用不添加抗菌肽的復合膜處理、實驗組用抗菌復合膜處理。研究在4℃環(huán)境下對冷鮮肉保藏品質的影響，結果表明:實驗組能夠抑制冷鮮肉表面微生物生長，減緩蛋白質分解和脂肪氧化。抗菌膜氧氣透過率為44.117 mL/(m2×d)高于陰性對照組(36.306m