酶解海灣扇貝裙邊制備抗菌肽的研究

1、分類號：工S25壘：窆密級：公玨單位代碼：學(xué)號：100862010147酶解海灣扇貝裙邊制備抗菌肽的研究StudyonPreparationofAntibacterialPeptidesfromScallopSkrtbyEnZymaticHydrolysis學(xué)位申請人：指導(dǎo)教師：學(xué)科專業(yè)：學(xué)位類別：授予單位：答辯日期：楊富敏桑亞新副教授微生物學(xué)理學(xué)碩士河北農(nóng)業(yè)大學(xué)二。一三年十一月二十四日萬方數(shù)據(jù)摘要海灣扇貝(彳曙印ec把以f舢講儺)是我

2、國沿海養(yǎng)殖中規(guī)模較大的海產(chǎn)品，具有極高的營養(yǎng)價值和經(jīng)濟(jì)價值。貝柱(屬于扇貝的閉殼肌)是海灣扇貝中主要的食用部分，被作為主要的加工產(chǎn)品，而扇貝加工的副產(chǎn)物——裙邊則被作為廢棄物丟棄，造成了資源的大量浪費(fèi)和環(huán)境污染。扇貝裙邊富含蛋白質(zhì)，是優(yōu)質(zhì)的海洋蛋白來源，可以通過酶解產(chǎn)生抗菌肽?？咕囊蛞志鷻C(jī)制機(jī)制獨(dú)特，抗菌譜廣，不產(chǎn)生抗藥性，安全無污染，引起了國內(nèi)外學(xué)者的興趣。本文以扇貝裙邊為原料，通過酶解、超濾分離得到活性肽，再經(jīng)比濁法篩選抗菌肽，為

3、扇貝裙邊的開發(fā)利用和進(jìn)一步加工提供理論依據(jù)。酶解扇貝裙邊制備抗菌肽擴(kuò)大了海洋蛋白來源抗菌肽的種類和數(shù)量，具有積極的現(xiàn)實(shí)意義和經(jīng)濟(jì)價值。本文在前期研究的基礎(chǔ)上選用六種常見的商業(yè)蛋白酶(堿性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶)對扇貝裙邊進(jìn)行酶解。為了最大限度的的獲得海洋蛋白來源的抗菌肽，酶解試驗(yàn)以水解率為判定指標(biāo)，論文從六種蛋白酶中篩選出水解率最高的堿性蛋白酶和中性蛋白酶作為適用酶。通過優(yōu)化篩選影響水解率的單因素

4、試驗(yàn)條件，選擇水解溫度、pH值、酶與底物比、底物濃度四個顯著因素對扇貝裙邊酶解工藝進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計優(yōu)化，判定指標(biāo)為水解率。得到堿性蛋白酶酶解扇貝裙邊的最佳工藝條件為：pH為11、底物濃度為9％、反應(yīng)溫度40℃、【E】／【S】為12％，水解時間4h，在此最佳條件下水解率最大，為3604％；中性蛋白酶酶解扇貝裙邊的最佳工藝條件為：pH為9、底物濃度為4％、反應(yīng)溫度40℃、[E】／[S]為137名，水解時間4h，在此最佳條件下水解率最大，為2

5、883％。采用超濾技術(shù)對扇貝裙邊水解液進(jìn)行分離純化。首先將扇貝裙邊水解液通過4℃，lOOoo“s離心20min，收集上清液通過O45岬1水系濾膜過濾，去除雜質(zhì)。采用四個不同分子量的超濾膜(1kDa、3kDa、5kDa、10kDa)對濾液進(jìn)行分離，獲得SSPH—I(10kDa)五個不同分子量的組分。對不同組分的水解液進(jìn)行冷凍干燥。利用杯碟法和比濁法對獲得的活性肽進(jìn)行抑菌性的篩選，通過比較兩種方法的優(yōu)劣，最終確定比濁法為檢驗(yàn)活性肽抑菌性的主

6、要方法。通過篩選可知，堿性蛋白酶酶解液SSPHII(1kDa～3kDa)和中性蛋白酶酶解液SSPHII(1kDa～3kDa)、SSPHIII(3kDa～5kDa)具有抑菌效果。利用微量稀釋法測定這三個組分的最低抑菌濃度為：堿性蛋白酶扇貝裙邊酶解液SSPHII(1kDa～3kDa)對大腸桿菌的MIC值為40pg／ml，對金黃色葡萄球菌的MIC值為80Ig／ml；中性蛋白酶扇貝裙邊酶解液SSPHII(1kDa～3kDa)對大腸桿菌和金黃色葡