果實采后病害拮抗菌的分離篩選及其抑菌效果的研究.pdf

1、柑橘青霉病和梨黑斑病是柑橘、梨果實貯藏期的主要侵染性病害，是造成腐爛損失的重要原因。長期以來，使用化學(xué)殺菌劑一直被認(rèn)為是防治果實采后病害最有效的方法，但是存在著農(nóng)藥殘留、環(huán)境污染和病原菌抗藥性等諸多弊端，迫切需要新的安全的保鮮方法來取代化學(xué)殺菌劑的使用。生物防治是選擇對產(chǎn)品以及人體不造成危害的微生物，利用微生物之間的拮抗作用，抑制病原菌生長的一種有效防治采后病害的新途徑。 本研究旨在分離、篩選能夠抑制果實采后青霉、鏈格孢霉的拮抗

2、菌株，鑒定其生物學(xué)特性，并測定所篩選出的菌株YF1，YF4和BF2及不同混配處理對柑橘青霉病和梨黑斑病的抑制效果，以及在果實傷口的定殖情況，并對其保鮮機理進(jìn)行初步探討。主要結(jié)果如下： 1.拮抗菌的分離和篩選：用稀釋平板法，從果實傷口、果實表面、葉片以及果園根際土壤中分離得到102個菌株。應(yīng)用平板對峙法，通過初篩和復(fù)篩，離體篩選出10個菌株對青霉菌(Penicillium italicum)有拮抗作用，9個菌株對鏈格孢霉 (Alt

3、ernaria kilcuchiana)有拮抗作用。進(jìn)一步通過果實接種法，活體篩選出分別能明顯抑制青霉和鏈格孢霉的拮抗菌YF1，YF2和：BF2，室溫(約25℃)下抑菌率分別為79.12％，62.5％和66.67％。 2.拮抗菌的鑒定：根據(jù)酵母菌的形態(tài)特征、營養(yǎng)特征和生理特性，鑒定拮抗菌YFl為假絲酵母屬(Candida sp)，YF4為檸檬形克勒克酵母(Kloeckera apieulata)。在對拮抗菌BF2的鑒定中，首先采

4、用細(xì)菌傳統(tǒng)的鑒定方法，對菌體的表型、生理生化特征進(jìn)行了分類鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，BF2符合芽孢桿菌屬細(xì)菌的特征。進(jìn)而采用16S rDNA分子鑒定方法，通過同源性比對及系統(tǒng)發(fā)育分析，鑒定拮抗菌BF2為芽孢桿菌屬的蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)。 3.拮抗菌的抑菌試驗：當(dāng)拮抗菌濃度為10<'6>-10<'8>CFU/mL時，生物防治的效果與拮抗菌的濃度成正相關(guān)；分別在接種1×10<'8> CFU/mL拮抗菌YF1、YF4和

5、BF2的前48 h，24 h，2 h，0 h、后2 h，24 h，48 h接種病菌，同時和推后病菌接種時間，都可以維持抑菌效果，但是提前接種病菌拮抗菌的抑菌力會有所降低。拮抗菌的接種時間越早防治病害的效果越明顯；YF1與YF4等體積混合用于防治青霉病，果實發(fā)病率為12.50％，優(yōu)于YF1和YF4單獨使用的效果，差異顯著;YF1，YF4和BF2兩兩混合使用抑制梨黑斑病，均可顯著抑制梨黑斑病的發(fā)生，發(fā)病率分別為17.5％，10.00％和15

6、.83％，低于單獨使用一種拮抗菌；CaCl<,2>和低劑量化學(xué)殺菌劑能夠明顯增強拮抗菌的抑菌效果，水楊酸與拮抗菌結(jié)合使用與單獨使用拮抗菌相比，對柑橘青霉病和梨黑斑病發(fā)病率的影響不大。4.拮抗菌的生長動態(tài)：拮抗酵母菌YF1和YF4在有無青霉菌和鏈格孢霉菌作用的情況下都能夠在果實傷口迅速生長定殖。菌株YF1接種48 h后，數(shù)量增加123.26倍；同時接種青霉病菌，96 h后YF1的數(shù)量可增加至144.17倍，與鏈格孢霉同時接種，96 h后Y

7、F1數(shù)量增加至178.29倍；拮抗菌YF4接種72 h后，數(shù)量增加了近200倍，同時接種青霉病菌，72 h后繁殖數(shù)量是起始值的344.54倍，同時接種鏈格孢霉，72 h后繁殖數(shù)量是起始值的294.12倍。 5.用1×10<'8> CFU/mL的酵母菌YF1和YF4浸泡柑橘果實后，柑橘果皮的PAL(苯丙氨酸解氨酶)、POD(過氧化物酶)顯著升高，PPO(多酚氧化酶)顯著降低；在柑橘果實的傷口處添加青霉(Penicillium it