柑橘采后黑腐病菌的分離、鑒定及其拮抗酵母菌研究.pdf

1、本研究從自然發(fā)病的溫州蜜柑（Citrus.unshiu Marc cv.）果實(shí)上分離柑橘黑腐病原菌，結(jié)合形態(tài)學(xué)與rDNA-ITS序列分析確定該病原菌為柑橘鏈格孢（Alternaria citri），并對(duì)其生物學(xué)特性、田間侵染規(guī)律及拮抗酵母菌進(jìn)行了初步研究，得到了三株對(duì)柑橘采后黑腐病有很好防治效果的酵母菌株Wf-b-1,γ-60-11和Wm-9，主要研究結(jié)果如下：
　　 1.確定分離到的病原菌為柑橘黑腐病原菌：經(jīng)過(guò)形態(tài)學(xué)、果實(shí)致病

2、性檢測(cè)及rDNA-ITS序列分析三方面研究，確認(rèn)該病原菌為柑橘鏈格孢（Alternaria citri）。
　　 2.對(duì)柑橘黑腐病原菌的生物學(xué)特性研究：Alternaria citri在PDA培養(yǎng)基菌絲生長(zhǎng)最為旺盛，而在柑橘葉培養(yǎng)基上產(chǎn)孢量最大，可達(dá)3.13×106 spores/mL；pH值對(duì)Alternaria citri的菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢量沒(méi)有明顯影響。在以察氏為基礎(chǔ)培養(yǎng)基的不同碳源、氮源對(duì)Alternaria citri的

3、生長(zhǎng)測(cè)試中，葡萄糖是菌絲生長(zhǎng)最好的碳源，殼聚糖上產(chǎn)孢量最高，達(dá)1.80x106 spores/mL；牛肉膏是菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢量最好的氮源。Alternaria citri適宜的生長(zhǎng)溫度為25℃～32℃，最適溫度為30℃，最佳產(chǎn)孢溫度為32℃。光照條件對(duì)Alternaria citri菌絲生長(zhǎng)沒(méi)有顯著影響，但黑暗條件更利于產(chǎn)孢。Alternaria citri的致死溫度為55℃左右。藥劑敏感性測(cè)試實(shí)驗(yàn)顯示，在測(cè)試的幾種常用化學(xué)藥劑中，以10

4、00 mg/kg 25％咪鮮胺、1000 mg/kg 50％多菌靈和2,4-D+250mg/kg 70％純品甲托對(duì)Alternaria citri的抑制效果最好。
　　 3.初步確定柑橘鏈格孢侵染途徑：從花期至果實(shí)采收的各個(gè)時(shí)期，鏈格孢菌均可侵入果實(shí)而潛伏。在盛花期，發(fā)現(xiàn)花瓣、花萼、柱頭和子房均帶有黑腐病菌，尤其是花瓣上帶菌率為100％；在果實(shí)發(fā)育期，蒂部果皮和臍部果皮帶菌率最高，果實(shí)內(nèi)部也侵入了少量的病菌，說(shuō)明蒂部和臍部可能是

5、病菌侵入的兩種途徑。
　　 4.篩選出能有效防治Alternaria citri的酵母菌三株：在in vitro初篩和復(fù)篩得到對(duì)Alternaria citri有拮抗作用的酵母菌12株。進(jìn)一步通過(guò)in vivo篩選，得到能有效抑制Alternaria citri的拮抗酵母菌株Wf-b-1、γ-60-11和Wm-9。
　　 5.測(cè)定不同濃度拮抗酵母菌對(duì)Alternaria citri的抑制效果：在一定濃度范圍內(nèi)，拮抗酵母菌

6、株Wf-b-1、γ-60-11和Wm-9的抑菌效果均與懸浮液的濃度成正相關(guān)。在Alternaria citri濃度為1×105 spore/mL，拮抗酵母菌濃度為1×108CFU/mL時(shí)，培養(yǎng)8d后，Wf-b-1,γ-60-11和Wm-9控制果實(shí)發(fā)病率分別為16.49％，20.74％和25.44％。抑制率分別為55.57％，56.65％和50.48％。 6.鑒定拮抗酵母菌：經(jīng)形態(tài)、生理生化指標(biāo)及rDNA-ITS序列分析對(duì)Wf-b-1和W