淡水源蛭弧菌的分離、鑒定與裂解特性研究.pdf

1、蛭弧菌是一類專門以捕食細菌為生的小型寄生性細菌,它具有寄生和裂解細菌的生理特性,尤其是對許多致病性革蘭氏陰性菌具有較強的裂解作用。本實驗采用雙層瓊脂平板法以施氏假單胞菌作為宿主菌從上海市浦東新區(qū)泥城鎮(zhèn)某中華鱉養(yǎng)殖池池水和上海市楊浦區(qū)復興島運河河水和淤泥樣中篩選到了6株菌(分別命名為AS212,JS221,JS223,JS413,JS422和N322)。通過對這6株菌進行形態(tài)學觀察,包括6株菌在雙層瓊脂平板上形成噬菌斑的形態(tài)和利用透射電子

2、顯微鏡觀察到的不同生活階段的形態(tài),對照《伯杰氏系統(tǒng)細菌學手冊》(第二版),其噬菌斑形態(tài)和透射電鏡下形態(tài)均符合蛭弧菌的典型特征。最后,對6株菌的16S rRNA基因進行擴增,將測序后所獲得的序列與GenBank中與已有的相關序列進行比較,并對其進行系統(tǒng)進化分析。然后,我們選取了其中一株裂解能力較強的蛭弧菌AS212,研究其在不同鹽度、溫度和pH條件下的裂解效果和生長實驗,測定了其對不同來源菌株的裂解譜,分析了其對養(yǎng)殖水體中細菌的消除作用,

3、同時與水產養(yǎng)殖中常用消毒劑溴氯海因和三氯異氰尿酸進行對比。最后,通過AS212菌株在凡納濱對蝦幼體培育中模擬應用,測定了菌株 AS212對凡納濱對蝦幼體培育水體中細菌數量的影響和蛭弧菌數量的變化,以及對水體pH、NH4+-N、NO3--N、NO2--N和凡納濱對蝦成活率的影響。
　　本研究結果表明,這6株菌所形成的噬菌斑的形態(tài)均為圓形、透明、邊緣整齊,透射電鏡觀測其形態(tài)為短桿狀,端生單根鞭毛。從噬菌斑的形成、裂解特性和細菌形態(tài)來看

4、,這6株菌屬于蛭弧菌。對它們的16S rRNA基因序列分析和系統(tǒng)進化分析發(fā)現,菌株 JS413為 Bacteriovorax屬,種未定;菌株 N322為Bdellovibrio bacteriovorus;而菌株AS212、JS221、JS223和JS422與同源關系最近的Bdellovibrio sp. HEA(AY294216)相似性只有90％,它們與典型的蛭弧菌Bdellovibrio bacteriovorus HD100T(A

5、J292759)親緣關系較遠,相似性只有80%,有可能是 Bdellovibrio屬的一個新種,稱其為蛭弧菌類生物更為合適。蛭弧菌AS212菌株的裂解能力結果表明,該菌株不僅能裂解大腸桿菌、嗜水氣單胞菌、弧菌等革蘭氏陰性菌,還能裂解無乳鏈球菌、金黃色葡萄球菌、芽孢桿菌等革蘭氏陽性菌;蛭弧菌 AS212比溴氯海因和三氯異氰脲酸對消除養(yǎng)殖水體中細菌更有優(yōu)勢。AS212菌株在凡納濱對蝦幼體培育中模擬應用結果發(fā)現,添加蛭弧菌AS212后凡納濱對