燦爛、哈維弧菌噬菌體的分離鑒定及其生物學(xué)特性的研究.pdf

1、在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中，海水養(yǎng)殖生物的弧菌病是1種危害非常嚴(yán)重、流行范圍比較廣的傳染性疾病。哈維弧菌和燦爛弧菌就是其中兩種致病菌。哈維弧菌和燦爛弧菌都屬于革蘭氏陰性菌。哈維弧菌是一種可以發(fā)光、在海水分布范圍非常廣的致病細(xì)菌。早期有關(guān)哈維弧菌的報(bào)道并不是很多，但是隨著哈維弧菌給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來的損失越來越大，近10幾年里我們對(duì)其報(bào)道變得越來越多。哈維弧菌是很多海水養(yǎng)殖魚類的致病菌，也是一些亞洲國(guó)家（印度，泰國(guó)，中國(guó)等）養(yǎng)殖對(duì)蝦的首要致病菌。燦爛弧菌

2、可以引發(fā)大西洋鮭、鱒魚、大菱鲆等許多種魚類患病，主要癥狀為魚類尾部出血、表皮潰爛，進(jìn)而形成潰瘍。燦爛弧菌也是刺參腐皮病的重要致病菌之一?，F(xiàn)在我們主要的預(yù)防和治療手段還是依靠消毒劑和抗生素，這些傳統(tǒng)的抗生素類藥物濫用很容易使細(xì)菌產(chǎn)生抗藥性同時(shí)還伴隨著藥物殘留等食品的安全問題，所以我們急需尋找新的抗菌手段。噬菌體作為一種新型的抗菌制劑，具有無副作用、病原菌很難對(duì)其產(chǎn)生抗性、無殘留等一系列的優(yōu)點(diǎn)。越來越的受到人們的廣泛關(guān)注。這對(duì)于養(yǎng)殖過程中潛

3、在的環(huán)境污染問題，保持水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展具有十分重要的意義。本研究從養(yǎng)殖場(chǎng)的水樣中分離得到哈維弧菌噬菌體和燦爛弧菌噬菌體并考察其生物學(xué)特性，為以后用噬菌體治療細(xì)菌所引起的傳染性疾病奠定了基礎(chǔ)。因此具有十分重要的理論和實(shí)踐意義。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴以哈維弧菌和燦爛弧菌作為宿主菌，利用雙層瓊脂平板法從廢水樣品中分別分離得到了1株噬菌體，經(jīng)過純化后利用液體增值的方法可以得到效價(jià)為108的噬菌體。噬菌斑呈圓形，經(jīng)過12個(gè)小時(shí)

4、以上的培養(yǎng)，直徑分別達(dá)到哈維弧菌噬菌體2mm，燦爛弧菌噬菌體1.5mm，中心透明，邊緣清晰。噬菌體經(jīng)過增之后的效價(jià)比較高，體外裂解能力較強(qiáng)，可以作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)材料。⑵分別對(duì)哈維弧菌噬菌體和燦爛弧菌噬菌體的生理生化進(jìn)行的測(cè)定，結(jié)果顯示：兩株噬菌體對(duì)氯仿均不敏感，證明其尾部不含有脂類物質(zhì)。2株噬菌體的熱穩(wěn)定性一般，在50℃的情況下還能保持一半的效價(jià)，60℃效價(jià)基本為0。PH的穩(wěn)定性較強(qiáng)，在PH為4-11之間均有效價(jià)，當(dāng)PH在6-8的時(shí)候

5、2株噬菌體的效價(jià)最好。哈維弧菌噬菌體最佳感染復(fù)數(shù)為0.0001；燦爛弧菌噬菌體為0.001。哈維弧菌噬菌體的潛伏期是40分鐘，爆發(fā)期為1小時(shí)；燦爛弧菌噬菌體的潛伏期是30分鐘，爆發(fā)期為1小時(shí)。⑶通過電鏡觀察2中噬菌體均為有尾絲的正20面體結(jié)構(gòu)，哈維弧菌噬菌體全長(zhǎng)235nm，燦爛弧菌噬菌體全長(zhǎng)315nm。用10種不同的細(xì)菌分別驗(yàn)證2種噬菌體的特異性證明2種噬菌體的特異性均非常的強(qiáng)。但是它們的裂菌普卻很窄，哈維弧菌噬菌體僅能對(duì)個(gè)別的其他哈維